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商品介绍:
测定意义 ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。 测定原理 在乙醛存在下,ADH催化NADH氧化生成NAD+;在340nm处测定NADH的减少量,可计算出ADH活性。 实验中所需仪器及用品 研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1ml石英比色皿、可调式移液器和双蒸水。 |
商品属性:
产品名称 | |
检测方法 | 紫外分光光度法 |
产品规格 | 50管/48样 |
产品货号 | AS632111 |
试剂的组成和配制:
酸性提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;碱性提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体10 mL×1瓶,4℃保存;试剂二:液体3 mL×1瓶,4℃保存;试剂三:粉剂×1瓶,-20 ℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀,用不完的试剂4℃保存一周;试剂四:粉剂×1瓶,4 ℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀,用不完的试剂4℃保存一周;试剂五:液体3.6mL×1瓶,4 ℃保存;试剂六:液体30mL×1瓶,4 ℃保存;试剂七:液体50mL×1瓶,4 ℃保存。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
NAD+和NADH的提取:
1、血清(浆)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(浆)体积(ml):酸性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建 议取约0.1ml血清(浆),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失); 冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl碱性提取液使之中 和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 NADH的提取:按照血清(浆)体积(ml):碱性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建 议取约0.1ml血清(浆),加入1ml碱性提取液),95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失); 冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 | 2、组织中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:按照组织质量(g):酸性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议取约0.1g 组织,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴 中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 NADH的提取:按照组织质量(g):碱性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议取约0.1g 组织,加入1ml碱性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴 中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 | 3、细胞或细菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):酸性 提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml酸性提取液), 超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),95℃水浴5min (盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加 入500μl碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 NADH的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):碱 性提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml碱性提取液), 超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),95℃水浴5min (盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 |
ADH测定操作:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴中保温30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、800μL试剂二和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 测定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A3和A4。△A测定管=A3-A4。
注意:空白管只需测定一次。
三碘状腺原(T3)英文名:T3 ELISA Kit二磷腺苷核糖基转移4抗体包装100g
乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)英文名:LF/LTF ELISA KitAKIRIN2蛋白抗体包装25g
乳脱氢(LDH)英文名:LDH ELISA KitADP核糖基化样因子8B抗体包装5g
溶菌(LZM)英文名:LZM ELISA Kit三磷腺苷家族蛋白2抗体包装1g
绒毛膜促性腺激β(β-CG)英文名:β-CG ELISA KitAKIRIN1蛋白抗体包装5g
绒毛膜促性腺激(CG)英文名:CG ELISA Kit锚定蛋白样蛋白1抗体包装1g
妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)英文名:PAPP-A ELISA Kit腺苷激2抗体包装5g
热休克因子1(HSF1)英文名:HSF1 ELISA Kit顶体前体蛋白抗体包装1g
热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)英文名:HSP gp96 ELISA Kit黑色瘤缺失样蛋白1抗体包装5g
热休克蛋白90(HSP-90)英文名:HSP-90 ELISA Kit未知糖基化转移AER61抗体包装100g
热休克蛋白70(HSP-70)英文名:HSP-70 ELISA Kit铁蛋白Fe65抗体包装25g
热休克蛋白60(Hsp-60)英文名:Hsp-60 ELISA Kit抑癌基因ras同源家族1抗体包装5g
热休克蛋白40(Hsp-40)英文名:Hsp-40 ELISA Kit转录激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗体包装100g
热休克蛋白27(HSP-27)英文名:HSP-27 ELISA Kit心钠抗体包装25g
热休克蛋白20(Hsp-20)英文名:Hsp-20 ELISA Kit酰tRNA合成2抗体包装1g
锚蛋白重复结构域蛋白20A3抗体纤维蛋白原(FG)BIX02188 是一种有效的选择性 MEK5 抑制剂,IC50 为 4.3 nM。 BIX02188 也选择性抑制 ERK5 活性, IC50 为 810 n
乙醇脱氢酶(ADH)测试盒50管/48样滑假丝酵母 3-氨基-5-苯基吡唑白介1Elisa
盘长孢状盘孢 苯基膦酸白介11Elisa
中国台湾假黄单胞 对甲酰基甲酯白介12Elisa
小孢链霉 2-苯基-1,3-白介12Elisa
砖红镰刀 三羟甲基烷三烯酸酯白介12Elisa
大肠埃希 5-降烯-2-羧酸叔丁酯白介12;23 p40Elisa
根瘤 烷磺酸吡啶盐白介12 p40Elisa
芹侧耳(杏鲍菇) 2,8-喹啉二白介15Elisa
海神鲁杰氏 基乙酸酐白介16Elisa
芽孢杆属 4-异氧基苯酸白介17Elisa
类银白紫丝膜 3-三氟甲氧基苯白介17AElisa
酿酒酵母 间三氟酮白介17BElisa
球孢白僵 根皮苷白介17CElisa
Pseudomonas plecoglossicida 尼泊金异丁酯白介17DElisa
海枣曲霉 6,11-二氢二苯并[b,e]硫杂卓-11-酮白介17FElisa
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。