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生产厂家厂商性质
上海市所在地
商品属性:
产品名称 | |
检测方法 | 紫外分光光度法 |
产品规格 | 50管/48样 |
产品货号 | AS632124 |
商品介绍:
测定意义 细胞内脂质的积累是脂质合成与分解失衡的结果。脂肪酸合成增多,而氧化分解降低,会导致细胞内脂质积累。FAS是脂肪酸合成关键酶,催化乙酰fu酶A和丙二酰fu酶A而生成长链脂肪酸。FAS普遍表达于各种组织细胞中,在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。 测定原理 以NADPH为还原力,FAS催化乙酰CoA和丙二酰CoA生成长链脂肪酸;通过测定NADPH的减少量,即可推算出FAS活性。 实验中所需仪器和用品 研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和双蒸水。 |
试剂的组成和配制:
酸性提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;碱性提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体10 mL×1瓶,4℃保存;试剂二:液体3 mL×1瓶,4℃保存;试剂三:粉剂×1瓶,-20 ℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀,用不完的试剂4℃保存一周;试剂四:粉剂×1瓶,4 ℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀,用不完的试剂4℃保存一周;试剂五:液体3.6mL×1瓶,4 ℃保存;试剂六:液体30mL×1瓶,4 ℃保存;试剂七:液体50mL×1瓶,4 ℃保存。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
NAD+和NADH的提取:
1、血清(浆)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(浆)体积(ml):酸性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建 议取约0.1ml血清(浆),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失); 冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl碱性提取液使之中 和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 NADH的提取:按照血清(浆)体积(ml):碱性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建 议取约0.1ml血清(浆),加入1ml碱性提取液),95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失); 冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 | 2、组织中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:按照组织质量(g):酸性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议取约0.1g 组织,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴 中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 NADH的提取:按照组织质量(g):碱性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议取约0.1g 组织,加入1ml碱性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴 中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 | 3、细胞或细菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):酸性 提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml酸性提取液), 超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),95℃水浴5min (盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加 入500μl碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 NADH的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):碱 性提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml碱性提取液), 超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),95℃水浴5min (盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 |
ADH测定操作:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴中保温30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、800μL试剂二和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 测定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A3和A4。△A测定管=A3-A4。
注意:空白管只需测定一次。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
成纤维细胞生长因子4(FGF4)英文名:FGF4 ELISA Kit艾滋病病制约锚定蛋白抗体包装5g
成纤维细胞生长因子13(FGF-13)英文名:FGF-13 ELISA Kit腺苷环化1抗体包装1g
成纤维细胞生长因子10(FGF10)英文名:FGF10 ELISA Kit核糖核L抑制蛋白抗体包装5g
超氧化物歧化(SOD)英文名:SOD ELISA KitRho GTP激活蛋白24抗体包装25g
超敏C反应蛋白(hs-CRP)英文名:hs-CRP ELISA KitGTP激活蛋白ASAP3抗体包装5g
肠脂肪结合蛋白(iFABP)英文名:iFABP ELISA Kit激活受体1C抗体包装25g
叉头框蛋白03(FoxP3)英文名:FoxP3 ELISA Kit整合样金属蛋白与凝血13型抗体包装1g
层连蛋白/板层(LN)英文名:LN ELISA Kit去整合样金属蛋白11抗体包装25g
草胺膦乙酰转移(PAT)英文名:PAT ELISA Kit去整合样金属蛋白12抗体包装5g
不对称二基精(ADMA)英文名:ADMA ELISA Kit去整合样金属蛋白15抗体包装1g
补体因子H(CFH)英文名:CFH ELISA Kit去整合样金属蛋白2抗体包装25g
补体片断5a(C5a)英文名:C5a ELISA Kit载脂蛋白E2受体抗体包装5g
补体片断3a(C3a)英文名:C3a ELISA Kit腺苷A1受体抗体包装100g
补体蛋白5(C5)英文名:C5 ELISA Kit通道蛋白0抗体包装1g
补体蛋白4(C4)英文名:C4 ELISA Kit转录因子AP-2γ抗体包装25g
淀粉样肽前体蛋白抗体结缔组织生长因子(CTGF)Isoindigotin is used in the therapy of Y.
脂肪酸合成酶(FAS)测试盒50管/48样谷棒杆 5-溴-3-氟-2(1H)-吡啶酮甲胎蛋白异质体3Elisa
红缘层孔 2,5-二溴-3-氟吡啶甲肟前列腺D2Elisa
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相思根瘤 2,3-二氟-4-丁氧基苯酸甲状腺过氧化物Elisa
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罗尔细薄 6-羧基四荧光甲状腺受体相互作用蛋白6Elisa
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