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生产厂家厂商性质
上海市所在地
产品分类:核酸杂交
储存条件:4℃,避光,6个月
用途:用于RNA的含甲酰胺的杂交缓冲液,溶解RNA,并保护RNA
注意事项:由PIPES、EDTA、氯化钠、去离子甲酰胺等组成。
公司产品仅用于科研具有质量可靠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点,咨询并订购!
产品名称 | 规格 | 货号 |
RNA杂交缓冲液 | 100ml | FS-R7407 |
配制与标定的实验原理:
1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一种白色晶体粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室温溶解度为0.02g/100g H2O。
2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂,基准试剂的预处理:称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层,然后用水洗净,烘干。
配制步骤:
1、取适量锌片放在100mL烧杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自来水、纯水洗净,烘干、冷却。
2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15~0.2g Zn,盖好小表面皿。
3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地将溶液转移至250mL容量瓶中,用纯水稀释至标线,摇匀。
实验方法与判定:
1.对照品溶液的稳定性
2.对照品溶液的配制:精密量取脑对照品适量,加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液,作为对照品溶液。
3.色谱条件:以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱;柱温120℃;进样口温度250℃;检测器温度250℃;分流进样,分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。
4.实验方法:配制的对照品溶液,一份置冷处保存,一份置室温中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液,三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法,并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来,保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%,验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
假单胞菌NK受体2C抗体Human LAPTM4B(Lysosomal-associated transmembrane protein 4B) ELISA Kit人抗卵巢抗体(AOAb)
新月弯孢霉性受体NK-p46抗体Human PTGS1(Prostaglandin G/H synthase 1) ELISA Kit人抗磷脂酰丝抗体(APSA)
橡胶树假丝酵母性受体NK-p30抗体Human COL28A1(Collagen alpha-1(XXVIII) chain) ELISA Kit人抗磷脂抗体(Apl/APA)
水生黄杆菌磷化谷受体2A抗体Human FBLN1(Fibulin-1) ELISA Kit人抗磷壁抗体(TA)
日本根霉NK受体2D抗体Human FLT4(Vascular endothelial growth factor receptor 3) ELISA Kit人抗淋巴球蛋白(ALG)
嗜热链球菌核呼吸因子-1抗体Human DICER1(Endoribonuclease Dicer) ELISA Kit人抗淋巴抗体(ALA/LCA)
多主葡萄壳菌神经肽Y受体2抗体Human KIF5A(Kinesin heavy chain isoform 5A) ELISA Kit人抗链球菌溶血O/抗O(ASO)
海泥黄杆菌神经丝蛋白抗体Human GAD2(Glutamate decarboxylase 2) ELISA Kit人抗尿激V2受体/精加压受体2(AVPR2)
粗皮侧耳(平菇)轴索过度生长抑制因子A+B抗体 Nogo-B/AHuman FGF6(Fibroblast growth factor 6) ELISA Kit人抗尿激/血管加压/精加压(ADH/VP/AVP)
紫芝神经元3抗体Human SERPINB4(Serpin B4) ELISA Kit人抗类固生成抗体(SCA)
孢小壳银汉霉NFkB诱导激抗体Human UCN3(Urocortin-3) ELISA Kit人抗类风湿关节炎核抗原抗体(RANA)
Aeromicrobium marinum核因子p50/k基因结合核因子抗体Human MYH1(Myosin-1) ELISA Kit人抗类风湿关节炎核抗原(RANA)
硬结节杆菌神经激肽A受体/K物质受体抗体Human UBB(Polyubiquitin-B) ELISA Kit人抗可提取核抗原抗体(ENA-Ab)
白环柄菇神经激肽B抗体Human FGFR1(Fibroblast growth factor receptor 1) ELISA Kit人抗可溶性肝抗原抗体(SLA)
产黄青霉神经粘蛋白抗体Human BCAM(Basal cell adhesion molecule) ELISA Kit人抗菌肽(CAMP)
产气荚膜梭菌 C型神经束蛋白抗体Human GLUL(Glutamine synthetase) ELISA Kit人抗菌肽(Attacin)
绿色木霉Trichoderma│viride 质量规格:>500U/MG,BR硫基葡萄糖
葡萄球菌Staphylococcus│sp. 质量规格:>98%,BR硫辛
苏云金芽孢杆菌Bacillus│thuringiensis 质量规格:0.97硫软骨
RNA杂交缓冲液MPO(Mouse myeloperoxidase) ELISA Kit 小鼠髓过氧化物mei规格: 48T
Gzms-B(Mouse granzymes B) ELISA Kit 小鼠颗粒meiB规格: 48T
VEGFR-1/Flt1(Mouse Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 1) ELISA Kit 小鼠血管内皮细胞生长因子受体1规格: 48T
Gzms-A(Mouse granzymes A) ELISA Kit 小鼠颗粒meiA规格: 48T
Lptn/LTN/XCL1(Mouse lymphotactin) ELISA Kit 小鼠淋巴细胞趋化因子规格: 48T