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公司产品仅用于科研具有质量可靠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点,咨询并订购!
产品名称 | 规格 | 货号 |
双链DNA中和缓冲液 | 100ml | FS-R7403 |
产品分类:核酸杂交
储存条件:室温,12个月
用途:又称为中性转移缓冲液,仅用于双链DNA的杂交
注意事项:由tris-hcl、氯化钠组成。
配制与标定的实验原理:
1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一种白色晶体粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室温溶解度为0.02g/100g H2O。
2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂,基准试剂的预处理:称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层,然后用水洗净,烘干。
配制步骤:
1、取适量锌片放在100mL烧杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自来水、纯水洗净,烘干、冷却。
2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15~0.2g Zn,盖好小表面皿。
3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地将溶液转移至250mL容量瓶中,用纯水稀释至标线,摇匀。
实验方法与判定:
1.对照品溶液的稳定性
2.对照品溶液的配制:精密量取脑对照品适量,加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液,作为对照品溶液。
3.色谱条件:以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱;柱温120℃;进样口温度250℃;检测器温度250℃;分流进样,分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。
4.实验方法:配制的对照品溶液,一份置冷处保存,一份置室温中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液,三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法,并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来,保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%,验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。
樟疫霉粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗体Human RGS3(Regulator of G-protein signaling 3) ELISA Kit人抗增殖核抗原抗体(PCNA)
贝伦格勒座腔菌梨专化型粘蛋白4抗体Human RGS10(Regulator of G-protein signaling 10) ELISA Kit人抗载脂蛋白抗体A1(Apo A1)
酿酒酵母v-maf 肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A抗体Human HMGB4(High mobility group protein B4) ELISA Kit人抗原提呈相关转运蛋白/T活化蛋白(TAP)
Phoma medicaginis var. medicaginis基质金属蛋白-10抗体Human PENK(Proenkephalin-A) ELISA Kit人抗硬皮病抗体70(SCL70/topoⅠ)
松乳菇突变型P53抗体Human RGS10(Regulator of G-protein signaling 10) ELISA Kit人抗异质型核糖核蛋白抗体/抗RA33抗体(anti-hnRNP-ab/anti-RA33-ab)
黄盖蜜环菌蜜蜂微孢子虫蛋白抗体Human ARSA(Arylsulfatase A) ELISA Kit人抗胰岛受体抗体(AIRA)
粉状毕赤氏酵母基质金属蛋白-24抗体Human HMGB4(High mobility group protein B4) ELISA Kit人抗(AT)
黑络丸巨噬甘露糖受体抗体Human RGS3(Regulator of G-protein signaling 3) ELISA Kit人抗眼肌抗体(EMAb)
酿酒酵母胃粘液抗体Human ATOH1(Protein atonal homolog 1) ELISA Kit人抗血小板抗体IgM(PA-IgM)
枯草芽孢杆菌基质金属蛋白20抗体Human KLF14(Krueppel-like factor 14) ELISA Kit人抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)
平脐蠕孢菌尿调节蛋白抗体Human MYH9(Myosin-9) ELISA Kit人抗血小板抗体IgG(PA-IgG)
根瘤菌肌增强因子2抗体Human AMSH(alpha-MSH) ELISA Kit人抗血小板抗体IgA(PA-IgA)
枯草芽孢杆菌肌原调节蛋白抗体Human PRSS2(Trypsin-2) ELISA Kit人抗血小板抗体(anti-PA Ab)
越南芽孢杆菌神经母特异性转移因子抗体Human IL17RB(Interleukin-17 receptor B) ELISA Kit人抗胸腺球蛋白(ATG)
酿酒酵母组织相关抗原HLA-B15抗体Human CDO1(Cysteine dioxygenase type 1) ELISA Kit人抗信号识别颗粒抗体(SRP)
Gordonia蛋腺苷转移抗体Human CYP2D6(Cytochrome P450 2D6) ELISA Kit人抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)
腐生葡萄球菌Staphylococcus│saprophyticus 质量规格:≥30units/mg protein,sigma原装蒙花苷
细极链格孢蒜生变种Alternaria│tenuissima var. alliicola 质量规格:进分没食子
无乳链球菌Streptococcus│agalactiae 质量规格:≥95%,半硫盐木犀草苷
双链DNA中和缓冲液ENA-78/CXCL5(Mouse Epithelial neutrophil activating peptide 78) ELISA Kit 小鼠上皮中性粒细胞活化肽78规格: 48T
OLAb(Mouse oxidized lowdensity lipoprotein antibody) ELISA KIT 小鼠氧化低密度脂蛋白规格: 48T
ASMA(Mouse Smooth Muscle Antibody) ELISA Kit 小鼠抗平滑肌规格: 48T
M30(Mouse Embryonic Stem MESPU30) ELISA Kit 小鼠胚胎干细胞系MESPU30规格: 48T
NF-κB p65(Mouse nuclear factor-κB p65) ELISA Kit 小鼠核因子κB亚基p65亲和肽规格: 48T
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。