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一、细胞基本属性：
细胞名称 | 小鼠肝Kuffer细胞 | 商品货号 | A01X1818 |
组织来源 | 正常肝脏组织 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 |
种属来源 | 小鼠 | 传代特性 | 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群 |
生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 梭形、巨噬细胞 |
包被条件：
培养基：原代巨噬细胞培养体系
换液频率：每2-3天换液一次
传代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
细胞简介 |
小鼠枯否细胞分离自肝脏组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方。肝脏是机体消化系统中大的消化腺，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面，大部分肝为肋弓所复盖，仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接。枯否氏细胞(Kupffer细胞)是肝脏的肝血窦内一些固定于窦壁的巨噬细胞，它能吞噬和清除大部分从肠道来的抗原微粒，并能吞噬和清除肝血窦中的细菌、异物和衰老的红细胞，并把血红蛋白分解成红素。此外，肝巨噬细胞也有处理抗原，诱导T细胞增殖，参与免疫调节的作用。枯否氏细胞和一般巨噬细胞不同，枯否氏细胞不具有增加抗原免疫原性的能力，相反有消除或减弱抗原性的作用。枯否氏细胞能吞噬来自血液循环的抗原抗体复合物和其他有害物质，以消除这些物质对机体的损害。枯否细胞功能障碍可导致肠源性内毒素血症。电镜下有很多皱褶和微绒毛。 |
原代细胞实验步骤：
一、取7-10d雄性SD大鼠，颈椎脱臼处死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超净工作台中，将大鼠断头置于玻璃培养皿中，打开颅腔后取出全脑,放在盛有预冷的PBS玻璃培养皿中，去除小脑和间脑。
三、将大脑半球在干滤纸上缓慢滚动以去除软脑膜和脑膜大血管，再放在新的盛有预冷的PBS玻璃培养皿中。
四、用细解剖镊去除大脑白质、残余大血管和软脑膜，保留大脑皮质。
五、大脑皮质放于DMEM中，剪碎成约1mm3大小，放入50ml的离心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型胶原酶，0 .025-0 .05％IV型胶原酶，200-400U DNaseI)，混匀后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室温1 000×g离心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重悬浮，充分混匀，1 000×g，20min，4℃离心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的胶原酶/分散酶，0.05-0.1％I型胶原酶，100-300U DNaseI )重悬浮，混匀，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室温离心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培养液悬浮混匀，铺于经离心形成连续梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃离心10min。
十、靠近底部的红细胞层之上的白黄色的层面即为纯化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗两次(离心1000×rpm，6min，室温)，去上清液。
加入DMEM培养液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重悬浮，接种于含5％的大鼠 血清37℃孵育过夜所制备的细胞培养皿中，置于37℃、5％CO2培养箱内静置培养24h后更换不含嘌呤霉素的混合培养基，随后隔天换液。
原代细胞使用方法：
是一种贴壁细胞，细胞形态呈梭形、巨噬细胞，在技术部标准操作流程下，细胞可传2-3代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；
3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基。
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml培养基终止消化；
3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml培养基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基(37℃预热)。
5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
公司正在出售的产品：
杂交瘤细胞株；6D7
小鼠骨髓杂交瘤细胞；6E11
杂交瘤细胞株；F8-M-01
杂交瘤细胞株；3D8
抗H9亚型流感病毒HA蛋白小鼠杂交瘤细胞株；S1B1
中国仓鼠卵巢细胞；CHO-rFVIII-11
杂交瘤细胞株；A5-E10
杂交瘤细胞株；11F10
杂交瘤细胞株；K3L35
杂交瘤细胞株；K3L25
杂交瘤细胞株；12E6
杂交瘤细胞株；7P1-7
杂交瘤细胞株；7P1-11
杂交瘤细胞株；FLUA-1A5
杂交瘤细胞株；WV-SPB-11
Brucella Selective Medium
C.L.E.D培养基
C.L.E.D Medium
C.L.E.D培养基添加剂
C.L.E.D Medium Supplement
GC琼脂
GC Agar
PEA琼脂
HB7035
艾格琼脂
小鼠肝Kuffer细胞Eugonic Agar
NTM培养基
NTM Medium
TM培养基
Thayer Martin Agar
