植物DNA核酸免提取试剂盒（高产量）

试剂盒应用

本试剂盒采用zhuan利裂解液配方在10分钟内完成植物叶片、根、茎、花蕊、种子等的裂解、提取和纯化。提取对象包括水稻、玉米、小麦、油菜等作物。整个提取过无需使用蛋白酶K等酶类制剂。提取DNA可用于PCR、qPCR、Sorthern Blot、分子克隆、文库构建等。

本试剂盒仅供研究使用，不可用于临床、食品、化妆品等领域。

试剂盒组成

备注：第一次使用前，在洗涤液DWB中加入48mL无水乙醇，并标记“√”和时间，避免重复加入。

保存条件

室温保存一年。

自备材料

水浴锅或金属浴、无水乙醇、无DNase和无RNase离心管、β-巯基乙醇、RNaseA（10mg/mL，或货号QR0101）

使用方法

1. 20-100mg新鲜植物样本经过液氮研磨后，加入700μL裂解液DPD和14μLβ-巯基乙醇，涡旋30秒。

2. 55℃孵育1分钟。

备注：淀粉含量高，例如马铃薯等直接进行步骤3。

3. 12,000rpm离心1分钟，吸取500μL上清液。

4. （选做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室温静置5-10分钟。

5. 加入250μL无水乙醇，上下颠倒混匀。

6. 全部加入DNA吸附柱中，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液。

7. 向DNA吸附柱中加入500μL洗涤液DWA，12,000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液。

8. 向DNA吸附柱中加入500μL洗涤液DWB，12,000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液。

9. 重复步骤8一次。

10. 12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。

11. 将DNA吸附柱放入新无DNase和无RNase离心管中，加入30-50μL洗脱液P，室温放置1分钟。

12. 12,000rpm离心2分钟，得到DNA溶液，-80℃保存。

注意事项

1. 经常更换手套，防止DNA污染。

2. 使用无DNase无RNase的吸头和离心管，防止DNA降解。

3. 常更换吸头，防止交叉污染。

4. 动作轻柔，防止基因组DNA断裂。

5. 为了提高洗脱效率，可提前将洗脱液P置于65℃水浴后再使用。