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快速DNA免核酸提取荧光PCR检测试剂盒
试剂盒简介:本试剂盒中采用du特配方,能够快速高效的裂解各种常见样本,无需液氮研磨,无需使用有机试剂,无需重复离心便可获得高质量的DNA。该DNA无需进行纯化可以直接用于PCR、荧光定量PCR、Lamp等扩增。本产品可用于各种植物(烟草、拟南芥、水稻、大豆、油菜、玉米、小麦等)以及各种植物蛋白饮料中基因组DNA的提取。2×荧光PCR MIX 试剂中引入了dUTP/UDG防污染系统,可消除扩增污染对qPCR的影响。
组分 | M-DNA01 |
DNA-Lysis | 1 mL (50T) |
2×荧光 PCR MIX | 500 μL ( 50T ) |
样品稀释液 | 1.5ml×4 ( 50T ) |
保存期:-20ºC 保存,保存期一年。
注意:使用前将DNA-Lysis室温充分混匀。
一、 不同样品的处理方法
(一)植物样品的处理
1. 叶片的处理
(1)用眼科剪或叶片取样器剪取1-4mm的叶片。
(2)加入20 μL DNA Lysis。
(3)充分混匀。
(4)置于55℃作用5分钟,加入100µL样品稀释液混匀,取1-2μL作为PCR反应模板。
2.种子和果实的处理
(1)研磨后种子或1-2mm果肉放入离心管中。
(2)加入20 μL DNA Lysis。
(3)充分混匀。
(4)置于55℃作用5分钟,加入100µL样品稀释液混匀。
(5)10,000rpm离心1分钟,取1-2μL作为PCR反应模板。
(二)植物蛋白饮料样品的处理
(1)吸取20 μL DNA Lysis,放入离心管中。
(2)吸取10μL 待检测样品,加入(1)中,混匀。
(3)置于55℃作用5分钟后,加入100µL样品稀释液混匀。
(4)取1μL作为荧光PCR反应模板。
二、在DNase free 的离心管中配制PCR反应体系
PCR反应体系 | 20 μL体系(推荐) |
2×荧光PCR MIX | 10 μL |
Forward Primer (10 μM) | 0.4-1μL |
Reverse Primer (10 μM) | 0.4-1 μL |
TaqMan Probe | 0.4-1 μL |
Template DNA | 1 μL |
ddH2O | 补足至20 μL |
三、反应程序
温度 | 时间 | 循环数 |
37ºC | 2min | 1 |
95ºC | 2min | 1 |
95ºC | 10sec |
40-45 |
60ºC | 30sec |
(1)在进行大量样品检测时,可将本试剂盒的试剂预分装到8联 PCR管,用多通道移液器进行多样本的处理。
(2)取样的细胞量应当适中,浓度不宜过高或过低,处理后溶液应当以透明为宜。扩增细胞DNA 时,取2000个细胞以内即可;扩增病毒基因时需要根据病毒的滴度决定取样的细胞数量。
(3)样品处理过程中应当防止交叉污染,推荐设置阴性样品参与处理过程,以检测环境的污染。
(4)PCR的退火温度可根据引物的预测Tm值减去5℃,或者通过梯度PCR摸索最佳退火温度。
(5)用本试剂盒处理的样品可于-20℃保存 1个月。
(6)为防止试剂盒污染,请勿将不同批号试剂盒混用。