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快速病毒DNA/RNA免核酸提取
荧光PCR检测试剂盒
试剂盒简介:本试剂盒中采用du特配方,能够快速高效的裂解各种常见样本,无需重复离心便可获得高质量的病毒DNA/RNA。该DNA/RNA无需进行纯化可以直接用于TaqMan等荧光标记探针的高特异性检测。本产品可用于细胞培养液、血液、血清中病毒DNA/RNA的提取。2×q PCR Mix、5×one step qRT- PCR Mix试剂中均引入了dUTP/UDG防污染系统,可消除扩增污染对qPCR的影响。
组分 | M-DNA01 |
DNA/RNA-Lysis | 1.5 mL (50T) |
2×q PCR Mix | 500 μL ( 50T ) |
200 μL ( 50T ) | |
样品稀释液 | 20 ml ( 50T ) |
保存期:-20ºC 保存,保存期一年。
注意:使用前将DNA/RNA-Lysis室温充分混匀。
一、 样品的处理方法
1.少量样本处理方法
(1)吸取15μL样本放入1.5ml离心管中。
(2)加入25 μL DNA/RNA Lysis。
(3)充分混匀,室温静置5分钟,加入350µL样品稀释液混匀。
(4)10,000rpm离心1分钟,取1-2μL作为PCR反应模板。
2.大量样本处理方法
(1)分别吸取15μL不同的样本依次放入8联管中。
(2)加入25 μL DNA/RNA Lysis。
(3)充分混匀,室温静置5分钟,10,000rpm离心1分钟。
(4)分别从(3)中吸取10μL处理后样品依次加入一新的8联管。
(5)每孔分别加入90µL样品稀释液混匀。取1-2μL作为荧光PCR反应模板。
二、以DNA为模板的PCR反应体系及反应程序
PCR反应体系 | 20 μL体系(推荐) |
2×q PCR Mix | 10 μL |
Forward Primer (10 μM) | 0.4-1μL |
Reverse Primer (10 μM) | 0.4-1 μL |
TaqMan Probe | 0.4-1 μL |
Template DNA | 1 μL |
ddH2O | 补足至20 μL |
温度 | 时间 | 循环数 |
37ºC | 2min | 1 |
95ºC | 5min | 1 |
95ºC | 10sec |
40-45 |
60ºC | 30sec |
三、以RNA为模板的PCR反应体系及反应程序
PCR反应体系 | 20 μL体系(推荐) |
5×one step qRT- PCR Mix | 4μL |
Forward Primer (10 μM) | 0.4-1μL |
Reverse Primer (10 μM) | 0.4-1 μL |
TaqMan Probe | 0.4-1 μL |
Template RNA | 1-2 μL |
ddH2O | 补足至20 μL |
温度 | 时间 | 循环数 |
55ºC | 15min | 1 |
95ºC | 30sec | 1 |
95ºC | 10sec |
40-45 |
60ºC | 30sec |
(1)在进行大量样品检测时,可将本试剂盒的试剂预分装到8联 PCR管,用多通道移液器进行多样本的处理。
(2)取样的细胞量应当适中,浓度不宜过高或过低,处理后溶液应当以透明为宜。扩增病毒基因时需要根据病毒的滴度决定取样的细胞数量。
(3)样品处理过程中应当防止交叉污染,推荐设置阴性样品参与处理过程,以检测环境的污染。
(4)PCR的退火温度可根据引物的预测Tm值减去5℃,或者通过梯度PCR摸索最佳退火温度。
(5)用本试剂盒处理的样品可于-20℃保存 1个月。
(6)为防止试剂盒污染,请勿将不同批号试剂盒混用。