NuSmart^®植物组织PCR试剂盒

（免核酸提取）

试剂盒应用

本试剂盒适用于烟草、拟南芥、水稻、大豆、油菜、玉米、小麦等叶片和种子的PCR、荧光定量PCR 检测。使用该试剂盒无需液氮研磨，无需使用有机试剂，无需重复离心便可获得用于PCR反应的基因组模板。

依托Nu-Smart^®平台DNA-Lysis采用zhuan利配方，5分钟内获得花瓣、花蕊、种子、叶片、根、茎等样本的基因组DNA。叶片仅仅需取材1-4mm，取样量小，减少对样品的损耗。

预制的2×TaqMix (With Dye)只需要加入引物和模板DNA即可进行PCR反应，减少移液次数，实现高通量扩增。该体系中添加有电泳缓冲液和染料，PCR结束后直接进行琼脂糖凝胶电泳，使用方便快捷。

本试剂盒仅供研究使用，不可用于临床、食品、化妆品等领域。

试剂盒组成

保存条件

-20ºC保存。

使用前将DNA-Lysis室温充分混匀，经常使用可4℃保存。

2×TaqMix (With Dye)溶解后需置于冰上，避免反复冻融。

需要准备

金属恒温浴、PCR仪

使用方法

一、不同样品的处理方法

1. 叶片的处理

（1）用眼科剪或叶片取样器剪取1-4mm的叶片。

（2）加入20 μL DNA-Lysis。

（3）充分混匀。

（4）置于55℃作用5分钟。溶液即为DNA模板。

2. 种子和果实的处理

（1）研磨后种子或1-2mm果肉放入离心管中。

（2）加入20 μL DNA-Lysis。

（3）充分混匀。

（4）置于55℃作用5分钟。

（5）10,000rpm离心1分钟，上清即为DNA模板。

二、推荐PCR反应体系

※：引物浓度可以在0.1-0.5 μM范围内进行调节。

三、按照以下方法设定PCR反应

注意事项

一、试剂盒使用前注意事项

（1）所有试剂应按照zhi定温度储存。请勿反复冻融。

（2）使用前后均需要对操作区进行消毒，消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除剂等。耗材均需使用商品化的无酶耗材。

（3）DNA-Lysis频繁使用，可在4℃保存。长期不使用可放-20℃保存。

二、样本注意事项

（1）不同叶片使用不同的取样器进行处理，防止交叉污染导致检测结果偏差。

（2）叶片剪取不宜过大，以1-4mm为宜。

（3）种子样本大小不一，建议研磨后使用。

三、试剂盒使用过程中注意事项

（1）PCR过程中推荐使用阴性对照和阳性对照。

（2）整个过程中使用的吸头、离心管等耗材应丢弃在含有75%乙醇或核酸消除剂的容器中，减少环境污染。

（3）2×TaqMix (With Dye)包含染料，可在反应结束后直接进行琼脂糖凝胶电泳。

（4）不能使用其他品牌的taq酶，进行PCR扩增检测。

四、试剂盒使用后注意事项

（1）DNA-Lysis处理后的DNA模板可在-20℃保存至少1个月，如需长期保存，可离心后取上清置-80℃保存。避免反复冻融，防止基因组断裂。

（2）PCR反应完成后，严禁在实验区开盖。应在污染区进行琼脂糖凝胶电泳，防止气溶胶污染。

（3）为防止试剂盒污染，请勿将不同批号试剂盒混用。