快速病毒RNA免核酸提取

SYBR Green荧光PCR检测试剂盒

试剂盒简介：本试剂盒中采用du特配方，能够快速高效的裂解各种常见样本，无需重复离心便可获得高质量的病毒RNA，适用于以RNA为模板的定量PCR的检测。本产品可用于细胞培养液、血液、血清中病毒RNA的提取。

试剂盒组成

保存期：-20ºC 保存，保存期一年。

注意：使用前将RNA-Lysis室温充分混匀。

准备的仪器：离心机、移液器、PCR仪

使用方法

一、 样品的处理方法

1.少量样本处理方法

（1）吸取15μL样本放入1.5ml离心管中。

（2）加入25 μL RNA Lysis。

（3）充分混匀,室温静置5分钟，加入350µL样品稀释液混匀。

（4）10,000rpm离心1分钟，取1-2μL作为PCR反应模板。

2.大量样本处理方法

（1）分别吸取15μL不同的样本依次放入8联管中。

（2）加入25 μL RNA Lysis。

（3）充分混匀,室温静置5分钟，10,000rpm离心1分钟。

（4）分别从（3）中吸取10μL处理后样品依次加入一新的8联管。

（5）每孔分别加入90µL样品稀释液混匀。取1-2μL作为荧光PCR反应模板。

二、在RNase free 的离心管中配制PCR反应体系(以ROCH 480 为测试机型)

三、反应程序

     对于有复杂结构的模板，可以将逆转录温度提高到55ºC，有助于提高扩增效率；

延伸时间请根据使用仪器所需要的数据采集最短时间进行调整；

溶解曲线的设定，根据仪器的默认采集程序设定即可。

注意事项

（1）在进行大量样品检测时，可将本试剂盒的试剂预分装到8联 PCR管，用多通道移液器进行多样本的处理。

（2）取样的细胞量应当适中，浓度不宜过高或过低，处理后溶液应当以透明为宜。扩增病毒基因时需要根据病毒的滴度决定取样的细胞数量。

（3）样品处理过程中应当防止交叉污染，推荐设置阴性样品参与处理过程，以检测环境的污染。

（4）PCR的退火温度可根据引物的预测Tm值减去5℃，或者通过梯度PCR摸索最佳退火温度。

（5）用本试剂盒处理的样品可于-20℃保存 1个月。

（6）为防止试剂盒污染，请勿将不同批号试剂盒混用。