20507ES10-琼脂糖树脂（GST标签蛋白纯化）_化学试剂-翌圣生物科技（上海）股份有限公司手机版

详细介绍

琼脂糖树脂（用于GST标签蛋白纯化）

GSTSep Glutathione Agarose Resin

产品信息

产品名称	产品编号	规格	储存	价格
GSTSep Glutathione Agarose Resin 琼脂糖树脂（用于GST标签蛋白纯化）	20507ES10	10ml	4℃	698.00
GSTSep Glutathione Agarose Resin 琼脂糖树脂（用于GST标签蛋白纯化）	20507ES50	50ml	4℃	2798.00
GSTSep Glutathione Agarose Resin 琼脂糖树脂（用于GST标签蛋白纯化）	20507ES60	100ml	4℃	6898.00

产品描述

GSTSep Glutathione Agarose Resin是一种GST标签蛋白纯化树脂，结构上以4%琼脂糖凝胶为基质，通过12个原子的间隔臂，用化学方法共价结合还原型制作而成。该设计使树脂的纯化效率得到了较大提高，使其每毫升基质可承载＞20mg GST融合蛋白。

此外，本品特异性好，性价比高，可以一步纯化各种表达系统中-S-转移酶、依赖性蛋白和重组衍生物。

产品性质

基质（Matrix）	4%琼脂糖微球
配体（Ligand）	通过12原子间隔臂偶联的
孔径（Bead size）	45-165µm
载量（Capacity）	＞20mg GST protein/ml 基质（40kDa）
zui大压力（Pressure_Max）	0.1 MPa, 1bar
pH稳定范围（pH range）	3-12
储存缓冲液（Buffer）	20%乙醇

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期2年。

需准备试剂

所用水和Buffer在使用前用0.22µm或0.45µm滤膜过滤除菌。

结合/洗杂缓冲液：PBS，pH7.4(140mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10mM Na₂HPO₄, 1.8mM KH₂PO₄, pH7.4)

洗脱缓冲液：50mM Tris-HCl, 10mM 还原型，pH 8.0

【注】：结合/洗杂缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1-10mM DTT。

使用方法

【注】样品在上样前用0.22µm或0.45µm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。

1样品纯化

1）装柱：将GSTSep Glutathione Agarose Resin装入合适的层析柱，注意避免产生气泡。

2）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡柱子，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

3）上样：Resin平衡后，加入蛋白样品，使其与Resin充分接触，提高目的蛋白回收率，收集流出液。

4）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂缓冲液进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

5）洗脱：使用5-10倍柱体积的洗脱缓冲液，收集洗脱液，即目的蛋白溶液。

6）清洗与保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，zui后用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。

2 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

3 填料清洗

GST标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，此时需对填料进行清洗。

1）去除一些沉淀或变形物质

用2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH7.4清洗。

注意事项

）请勿冷冻保存本产品。
）GSTSep Glutathione Agarose Resin使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附表 问题及解决方案

问题	可能原因	推荐解决方案
柱子反压过高	填料被堵塞	清洗树脂。
	填料被堵塞	裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前用0.22µm或0.45µm滤膜过滤，或离心去除。
	样品太黏稠	样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI （终浓度为5µg/ml），Mg²⁺(终浓度1mM)，冰上孵育10-15min
	缓冲液太黏稠	有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。
洗脱组分中无目的蛋白	GST标签蛋白变性了	使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。
	过度的裂解使目的蛋白变性	使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。
	目的蛋白聚集产生沉淀	在细胞裂解前溶液中加入DTT，终浓度为1-10mM
	融合蛋白改变了GST的构象，影响了目的蛋白的结合力	测定pGEX中GST的结合力，对载体进行超声处理，检测其结合力。如果载体中GST有很高的亲和力，有可能是改变融合蛋白的构象从而降低了GST标签蛋白的亲和力。
	融合蛋白改变了GST的构象，影响了目的蛋白的结合力	降低结合温度至4℃，充分清洗。
	柱子平衡时间太短，目的蛋白不是在pH6.5-pH8.0范围内结合	用pH6.5-pH8.0的buffer进行充分的平衡，如PBS.
目的蛋白没有*洗脱下来	洗脱体积太少	增加洗脱液体积，减小洗脱流速。
	洗脱液中浓度太低	增加洗脱液中浓度，可尝试用50mM Tris-HCl, 20-40mM还原型pH8.0洗脱
	低pH影响洗脱	在不增加洗脱液中量时，提高洗脱液中pH至pH8-9会有改善
	低pH影响洗脱	增加洗脱液中离子强度，如0.1-0.2M NaCl
	洗脱液中被氧化	使用新鲜配制的洗脱液
	洗脱液中被氧化	加入DTT
	非特异性疏水作用影响目的蛋白的溶解和洗脱	洗脱液中加入非离子型洗涤剂，如0.1%的Triton X-100或者2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷Tween-20
电泳或western blot检测中发现多条带	Mr 70000蛋白与目的蛋白一起纯化下来	Mr 70000蛋白可能是大肠杆菌基因DnaK的产物，可以在目的蛋白中加入50mM Tris-HCl, 2mM ATP, 10mM MgSO₄, pH 7.4在37℃加热10min去除。
	Mr 70000蛋白与目的蛋白一起纯化下来	可通过ATP-琼脂糖胶或离子交换来去除目的蛋白溶液中的dnaK蛋白
	GST融合蛋白已经发生降解	在裂解液中加入蛋白酶抑制剂，如加入1 mM PMSF
	GST融合蛋白已经发生降解	可能是蛋白酶对目的蛋白部分降解造成的，可使用蛋白酶缺陷型宿主菌（如lon-或ompT）
	细胞破碎过度	减少细胞破碎时间，超声前加入（菌液体积的0.1倍10mg/ml，25mM Tris-HCl，pH8.0），避免发泡导致蛋白酶变性，过度超声破碎增加宿主内源蛋白与GST融合目的蛋白的共纯化。
	共价共纯化	包括促进蛋白正确折叠的分子伴侣的共纯化，如：DnaK(Mr～70000), DnaJ(Mr～37000), GrpE(Mr ～40000), GroEL(Mr～57000), GroES(Mr～10000)
	抗体与E. coli的各种蛋白反应	抗体吸附E. coli蛋白：GST-抗体；超声处理去除GST抗体，可以用Western Blot检测

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产品编号	产品名称	规格	价格
20508ES10	GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 高速纯化树脂（用于GST标签蛋白纯化）	10ml	1238.00
20508ES50	GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 高速纯化树脂（用于GST标签蛋白纯化）	50ml	4568.00
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