Yeasen/翌圣生物 品牌
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DAPI 4’,6-联脒-2-苯基吲哚
面议Protein A/G Agarose Beads 蛋白A/G琼脂糖珠
面议Bovine Serum Albumin(BSA), DNase, Protease, IgG Fr
面议Anti-Flag亲和纯化凝胶
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¥593PNGase F (N-糖酰胺酶F或肽N-糖苷酶 F)
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
PNGase F (N-糖酰胺酶F或肽N-糖苷酶 F) | 20411ES01 | 15000 U | 763 |
PNGase F (N-糖酰胺酶F或肽N-糖苷酶 F) | 20411ES02 | 75000 U | 3373 |
产品描述
N-糖苷酶 F (PNGase F)是一种酰胺水解酶,经过和平空间站伊丽莎菌克隆,并在 E. coli大肠杆菌中重组表达,可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰氨残基之间的酰胺键,同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。本产品常应用于抗体及其相关蛋白*去糖基化。
产品性质
中文别名(Chinese synonym) | N-糖酰胺酶F;N-糖苷酶 F |
英文别名(English synonym) | PNGase F |
来源(Source) | 大肠杆菌表达 |
纯度(Purity) | 经SDS-PAGE及HPLC分析,纯度> 90% |
分子量(Molecular weight) | 36 kDa |
比活性(Specific activity) | 1,800,000 U/mg |
缓冲液组分(Buffer) | 20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50%Glycerol. |
酶活定义(Unit Definition) | 1个酶活力单位指在10 μL的反应体系中,37℃条件下1小时从 10 μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。 |
运输和保存方法
干冰运输;-20℃保存;有效期12个月。
使用方法
1、变性条件下蛋白质去糖基化:
1)将1μL 5%SDS和1μL 1 M DTT加入到12 μL目标糖蛋白(50 μg),总体积14 μL;
2)100℃温度下煮沸10 min使其变性,室温冷却5 min;
3)加入2 μL的0.5M磷酸钠缓冲液(pH 7.5)。如果pH在PNGase F(pH 6-10)范围内,可以使用其他缓冲液。20 mL 0.5 M磷酸钠(调制pH 7.5)的配置: 8.4 mL 1 M Na2HPO4,1.6 mL 1 M NaH2PO4 。
4)加入2 μL的10%NP-40。可用Triton X-100替代NP-40。PNGase F 的活性受 SDS 的抑制,所以在反应混合物中必须加入 NP-40。
5)加入1-2 μL的PNGase,在37℃孵育1-3 h。
2、非变性条件下蛋白质去糖基化:
1)在50 mM碳酸氢铵(pH 7.8)中加入20 μg的糖蛋白至终体积为18μL;
2)加入1-2 μL的PNGase F,在37°C孵育2-18 h。
注意:在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化,在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间。具体酶浓度见管壁标签
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
HB210129