Yeasen/翌圣生物 品牌
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面议Hieff® Long Taq DNA Polymerase 长片段DNA聚合酶
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff® Long Taq DNA Polymerase 长片段DNA聚合酶 | 10107ES62 | 125 U | 155.00 |
Hieff® Long Taq DNA Polymerase 长片段DNA聚合酶 | 10107ES78 | 5×125 U | 735.00 |
产品描述
Hieff® Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3’ →5’外切酶活性的蛋白组成的混合酶，其保真性是Taq DNA Polymerase的6倍，专门用于长片段的扩增。*的缓冲体系使Hieff® Long Taq DNA Polymerase可扩增长达8 kb的人基因组片段和10 kb左右的质粒模板。PCR扩增产物的3’端带A，可直接用于TA克隆。试剂盒中的PCR Enhancer有助于高GC含量片段的扩增。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 | |
10107ES62（125 U） | 10107ES78（5×125 U） | ||
10107-A | Hieff® Long Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 25 μL | 25 μL×5 |
10107-B | 10× Hieff® Long Taq Buffer（Mg2+ free） | 500 μL | 500 μL×5 |
10107-C | 25 mM MgCl2 | 1 mL | 1 mL×5 |
10107-D | dNTP Mix (10 mM each) | 100 μL | 100 μL×5 |
10107-E | 5 × PCR Enhancer | 125 μL | 125 μL×5 |
10107-F | 10 × Loading buffer | 1.25 mL | 1.25 mL×5 |
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃, 30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和1 μg λDNA -HindIII，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中，加入2 U本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
运输与保存方法
冰袋运输。-20º℃保存，有效期1年。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
PCR反应体系（推荐冰上配制）
组分 | 体积 |
ddH2O | to 50 μL |
10× Hieff® Long Taq Buffer（Mg2+ free） | 5 μL |
25 mM MgCl2 | 3-4 μL |
dNTP Mix (10 mM each) | 1 μL |
5 × PCR Enhancer | 适量 |
DNA模板 | 适量 |
Primer正向 (10 μM) | 2 μL |
Primer反向 (10 μM) | 2 μL |
Hieff® Long Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.5 μL |
【注】：
1）PCR Enhancer：推荐仅当扩增片段GC%> 60%且优化条件也无法正常扩增时用；可能会使保真度有轻微降低。
2）聚合酶浓度：酶量可在0.25-1 μL之间调整。通常情况下加大酶量可以提高扩增产量，但有可能会使特异性下降。
3）Mg2+终浓度：对于大多数由本酶催化的PCR反应来说，Mg2+的较优浓度为2 mM；如有特殊需要，可在终浓度1.5-2.5 mM区间内调整Mg2+浓度。
4）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）
模板种类 | 用量 |
动植物基因组DNA | 10-200 ng |
大肠杆菌基因组DNA | 1-100 ng |
λDNA、质粒DNA | 0.1-10 ng |
PCR扩增程序
1）目的片段＜5 kb
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 30 sec | 30-35 |
退火 | 55℃ | 30 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
终延伸 | 72℃ | 7 min | 1 |
【注】:退火温度需要根据引物退火温度调整，一般设置成低于引物退火温度1-2℃即可。
2）目的片段＞5 kb
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 1-3 min | 1 |
变性 | 94℃ | 10 sec | 30-35 |
退火/延伸 | 68℃ | 30-60 sec/kb | |
终延伸 | 68℃ | 7 min | 1 |
【注】:对于> 5 kb的片段，推荐使用长引物， Tm值在68-70℃，把退火/延伸温度合并为68℃。这样可以显著提高扩增特异性。延长延伸时间有助于提高扩增产量。
HB190523
