产品描述

多重荧光定量PCR预混液(含UDG)本产品是2×Mix预混合试剂，能够实现在单个反应孔中进行多达四重的荧光定量PCR反应。本产品含有基因改造的抗体法热启动Taq酶，极大地提高了扩增灵敏度和特异性。同时，本产品对多重反应缓冲体系进行了深度优化，能够提高反应的扩增效率，促进低浓度模板的有效扩增。本产品可用于基因分型和基因多重定量分析。本产品含有UDG酶，可有效防止气溶胶污染的风险。

产品组分

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。

注意事项

一、关于操作

1）请于使用前确保产品*解冻并*混匀，短暂离心收集至管底后，置于冰上备用。

2）为避免样品间交叉污染和气溶胶污染，推荐在超净台中进行反应体系的配制。

3）使用过程中避免产品的反复冻融。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

二、实验方法

a) 引物设计

1. 引物必须具有特异性。

2. 引物的Tm值必须在58-60°C，而且各组引物的Tm差异应控制在1-2°C。

3. 引物的长度一般控制在15-30 bp之间。

b) 探针设计

1. TaqMan探针的Tm值要比对应的引物高约10°C（68-70°C）。

2. TaqMan探针和引物间不能形成二聚体。

反应体系f

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-0.5 μM间进行调整。

b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-250 nM间调整。

c) Rox reference dye：使用在Applied Biosystems 等Real Time PCR 扩增仪上，用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差；本产品不含Rox reference dye。如需，推荐使用货号10200ES产品。

d) 模板稀释：qPCR灵敏度*，建议将模板进行稀释使用。若模板为cDNA原液，则模板体积不超过总体积的1/10；

e) 反应体系：推荐使用25 μL、30 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

f) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

参考扩增程序

【注】： a) 退火/延伸：温度和时间可根据实验要求适当调整。

b) 荧光信号采集：请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置，几种常见仪器的时间设定如下：

20 sec：Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast

31 sec：Applied Biosystems 7300

32 sec：Applied Biosystems 7500

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