Yeasen/翌圣生物 品牌
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上海市所在地
白细胞介素 12(IL-12)，也称为自然杀伤细胞刺激因子(NKSF)或细胞毒性淋巴细胞成熟因子(CLMF)，是一种异二聚体多效性细胞因子，由 40 kDa(p40)亚基和 35 kDa(p35)亚基组成。IL-12 p40亚基由IL-23共享，IL-23是另一种异二聚体细胞因子，具有与IL-12相似和不同的生物活性。IL-12由巨噬细胞和B细胞产生，已被证明对T细胞和自然杀伤(NK)细胞有多种作用。虽然小鼠IL-12在人和小鼠细胞上都有活性，但人IL-12在小鼠细胞上没有活性。
翌圣Human IL-12 p70 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定血清、血浆和细胞培养上清中的人白介素12 p70(Human IL-12 p70)。特异性抗人白介素12 p70抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的人白介素12 p70与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体（生/物/素标记）孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(HRP标记链霉亲和素)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中人白介素12 p70的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 主波长，570nm次波长测定吸光度值。
产品信息
货号 | 97025ES48 / 97025ES96 |
规格 | 48 T / 96 T |
检测范围 | 31.25-2000 pg/mL |
检测方法 | 双抗夹心法 |
检测物种 | 人 |
检测时长 | 5 小时 |
灵敏度 | 1.954 pg/mL |
稀释线性 | 81 - 127% |
回收率 | 70 - 107% |
板内差 | 5.0% |
板间差 | 8.4% |
实验数据
标曲数据
数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。
标准曲线图
浓度（pg/mL） | 显色值 | 平均值 | 校准值 | ||
2000 | 2.147 | 2.016 | 2.082 | 2.039 | |
1000 | 1.311 | 1.208 | 1.260 | 1.217 | |
500 | 0.732 | 0.651 | 0.691 | 0.649 | |
250 | 0.441 | 0.424 | 0.433 | 0.391 | |
125 | 0.220 | 0.218 | 0.219 | 0.177 | |
62.5 | 0.129 | 0.128 | 0.129 | 0.086 | |
31.3 | 0.089 | 0.086 | 0.087 | 0.045 | |
0 | 0.043 | 0.042 | 0.042 | / | |
灵敏度检测
人白介素12 p70的 检测限为1.954 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
精密度检测
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定20次，评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测36次，评估酶标板间的精密度。
项目 | 板内精密度 | 板间精密度 | ||||
样本 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
20 | 20 | 20 | 36 | 36 | 36 | |
平均值 | 1393.2 | 304.7 | 69.2 | 1247.7 | 304.6 | 68.2 |
标准差 | 68.3 | 14.0 | 3.8 | 130.8 | 30.5 | 3.1 |
变异系数（%） | 4.9 | 4.6 | 5.4 | 10.5 | 10.0 | 4.6 |
回收率检测
通过不同水平的人白介素12 p70添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:
样本类型 | 平均回收率(%) | 范围（%） |
血清 | 88.3 | 71.8-104.0 |
血浆 | 82.3 | 70.5-95.5 |
细胞培养上清 | 95.5 | 79.7-107.6 |
稀释线性检测
血清稀释比例 | 平均期望值(%) | 范围（%） |
1:02 | 87.7 | 85.2-92.0 |
1:04 | 93.8 | 89.3-99.5 |
1:08 | 99.7 | 89.8-109.2 |
1:16 | 102.8 | 86.5-117.8 |
血浆稀释比例 | 平均期望值(%) | 范围（%） |
1:02 | 91.2 | 87.8-97.2 |
1:04 | 106.2 | 102.2-112.5 |
1:08 | 115.2 | 113.7-116.9 |
1:16 | 123.0 | 116.1-127.1 |
细胞培养上清稀释比例 | 平均期望值(%) | 范围（%） |
1:02 | 89.9 | 81.6-103.3 |
1:04 | 111.2 | 98.5-118.5 |
1:08 | 114.8 | 108.3-121.6 |
1:16 | 117.8 | 111.9-123.9 |
样本值
应用本试剂盒，检测若干健康志愿者的样本，志愿者的用药史不详。
样本类型 | 样本数目 | 平均值（pg/mL） | 样本值（pg/mL） |
血清 | n.d. | n.d. | n.d. |
EDTA血浆 | n.d. | n.d. | n.d. |
肝//素血浆 | n.d.-152.3 | 32 | n.d.-152.3 |
枸//橼//酸钠血浆 | n.d. | n.d. | n.d. |
细胞培养上清 | n.d. | n.d. | n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得31.25 pg/mL
测定特异性
本试剂盒识别天然和重组//人/白/介素12 p70。在50 ng/mL条件下制备的下述因子进行了特异性的评估，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
Recombinant human: | Recombinant mouse: |
G-CSF | IL-6 |
GP130 | IL-12/IL-23 p40 |
IL-6 | IL-12 p70 |
IL-6 Rα | IL-23 |
IL-12 p35 | IL-27 |
IL-12/IL-23 p40 | |
IL-12 Rβ1 | |
IL-12 Rβ2 | |
IL-23 | |
IL-27 |
问题 | 造成原因 | 解决方法 |
标曲不好 | 移液量不准确 | 检查移液器，按时校准，仔细操作，充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
稀释方法不恰当 | ||
显色值偏低 | 孵育时间太短 | 给予足够的孵育时间，样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
移液量不足或稀释不当 | 校准移液器和规范操作 | |
CV偏高 | 酶标板清洗不当 | 使用正确的洗涤工序；如果使用洗板机，检查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 | 准备新鲜洗液 | |
灵敏度较低 | 试剂盒储存不当 | 按照产品组分表进行保存。 |
