Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
产品简介
游离胆//固//醇(FC)是构成细胞膜的主要成分,也是合成性激素、胆汁酸、维生素D和肾上腺皮质激素等物质的重要原料,FC浓度可作为脂代谢的指标。本试剂盒的检测方法是微量法,既可以用可见分光光度计检测,也可以用酶标仪检测。该产品的检出限是0.119 μmol/mL,线性范围为0.125-6 μmol/mL。
作用原理是FC氧化酶可催化FC生成4-胆甾烯酮和H2O2,过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安//替//比//林和酚生成红色醌类化合物,其在500 nm有吸收峰,颜色深浅与FC含量成正比。作用方式如下:
测定总胆//固//醇(TC)请选择60723ES 总胆//固//醇(TC)含量检测试剂盒;测定游离胆//固//醇(FC)请选择60724ES 游离胆//固//醇(FC)含量检测试剂盒。
产品信息
货号 | 60724ES60 |
规格 | 100 T |
组分信息
组分编号 | 组分名称 | 规格 | 储存条件 |
60724-A | 工作液 | 20 mL | 2~8℃ |
60724-B | 标准品 | 10 mg | 2~8℃ |
储存条件
2~8℃保存,有效期6个月。
使用说明
【注意事项】实验之前建议选择3个预期差异大的样本做预实验,如果样本吸光值不在测量范围内,建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和溶剂:
可见分光光度计/酶标仪、天平、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、可调式移液枪、EP管、蒸馏水和异丙醇。
溶液的配制:
1)自备提取液异丙醇:大约需要110 mL,常温保存;试剂盒内提供一个30 mL棕色空瓶,仅做分装使用。
2)标准品溶液的配置:10 mg胆//固//醇使用前加入517 μL提取液,振荡溶解后即为50 μmol/mL的胆//固//醇标准溶液,2~8℃可保存4周。
3)标准溶液的稀释:取50 μmol/mL胆//固//醇标准液20 μL ,加入480 μL异丙醇,充分混匀,配制成2 μmol/mL的标准液。注意2 μmol/mL标准液最好现配现用,实验中每管需10 μL,但为减小实验误差,故配制体积偏大。
3. 操作步骤
1)样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
a. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约0.1 g组织,加入1 mL提取液)进行冰浴匀浆。8000 g,4℃离心10 min,取上清置冰上待测。
b. 细菌/细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1 mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300 w,超声2秒,间隔3秒,总时间3 min);然后 8000 g,4℃离心10 min, 取上清置于冰上待测。
c. 血清(浆)等液体样本:直接测定,若有沉淀请离心后取上清待测。
2)测定步骤
a. 可见分光光度计/酶标仪预热30 min以上,调节波长至500 nm,分光光度计蒸馏水调零。
b. 按需取出一定量的工作液,37℃水浴预热30 min。
c. 在1.5 mL EP管/96孔板按下表步骤加样
试剂名称(µL) | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
异丙醇 | 10 | - | - |
标准液 | - | 10 | - |
待测上清 | - | - | 10 |
工作液 | 190 | 190 | 190 |
充分混匀,室温静置15 min,反应完成后测定500 nm处吸光值A,分别记为A测定、A标准和A空白,ΔA测定=A测定-A空白,ΔA标准=A标准-A空白。空白管和标准管只需测1-2个。注:若样本为血清,则空白管中的提取液(异丙醇)需要更换为蒸馏水进行实验。 |
总胆//固//醇含量计算
a. 血清(浆)中 FC 含量计算:
FC含量(μmol/dL)=C标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)×100=200×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)
b. 组织或细胞、细菌中 FC 含量计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:FC含量(μmol/mg prot)=C标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A 空白)×V样总÷(Cpr×V样总)=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷Cpr
(2)按样本质量计算:FC 含量(μmol/g 质量)=C 标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)×V样总÷W=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷W
(3)按细胞/细菌数量计算:FC 含量(μmol/104 cell)=C 标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)×V样总÷N=(A测定-A 空白)÷(A标准-A空白)
C 标准液:标准液的浓度,2 μmol/mL;V 样总:加入提取液的体积,1 mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;100:单位换算系数,1 dL=100 mL;500:细菌或细胞数量,500万;N:细胞数量,以万计。
4. 实验实例:
取 0.1 g 大鼠肝脏加入 1 mL 提取液进行匀浆研磨,取上清后按照测定步骤操作,使用 96孔板测得A空白=0.046、A标准=0.354、A测定=0.127,按样本质量计算含量得:
FC含量(μmol/g 质量)=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷W =5.320 μmol/g 质量。
注意事项
如果样本吸光值大于1.2,建议将样本用提取液稀释后进行测定。
提取液中含有使蛋白变形的成分,故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅作科研用途!