(FC)含量检测试剂盒 微量法

60724ES(FC)含量检测试剂盒 微量法

参考价: ¥785

具体成交价以合同协议为准
2024-02-18 16:38:05
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属性:
供货周期:两周;应用领域:医疗卫生,生物产业;
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100;
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应用领域
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(FC)含量检测试剂盒 微量法

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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品简介

游离胆//固//醇(FC)是构成细胞膜的主要成分,也是合成性激素、胆汁酸、维生素D和肾上腺皮质激素等物质的重要原料,FC浓度可作为脂代谢的指标。本试剂盒的检测方法是微量法,既可以用可见分光光度计检测,也可以用酶标仪检测。该产品的检出限是0.119 μmol/mL,线性范围为0.125-6 μmol/mL。

详细介绍

产品简介

 

游离胆//固//醇(FC)是构成细胞膜的主要成分,也是合成性激素、胆汁酸、维生素D和肾上腺皮质激素等物质的重要原料,FC浓度可作为脂代谢的指标。本试剂盒的检测方法是微量法,既可以用可见分光光度计检测,也可以用酶标仪检测。该产品的检出限是0.119 μmol/mL,线性范围为0.125-6 μmol/mL


作用原理是FC氧化酶可催化FC生成4-胆甾烯酮和H2O2,过氧化物酶催化H2O24-氨基安//替//比//林和酚生成红色醌类化合物,其在500 nm有吸收峰,颜色深浅与FC含量成正比。作用方式如下:

测定总胆//固//醇(TC)请选择60723ES 总胆//固//醇(TC)含量检测试剂盒;测定游离胆//固//醇(FC)请选择60724ES 游离胆//固//醇(FC)含量检测试剂盒。

 

产品信息

 

货号

60724ES60

规格

100 T

 

组分信息

 

组分编号

组分名称

规格

储存条件

60724-A

工作液

20 mL

2~8℃

60724-B

标准品

10 mg

2~8℃

 

储存条件

 

2~8℃保存有效期6个月

 

使用说明

 

注意事项实验之前建议选择3个预期差异大的样本做预实验如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

  1. 需自备的仪器和溶剂

可见分光光度计/酶标仪、天平、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、可调式移液枪、EP管、蒸馏水异丙醇。

  1. 溶液的配制:

1)自备提取液异丙醇大约需要110 mL,常温保存;试剂盒内提供一个30 mL棕色空瓶,仅做分装使用。

2)标准品溶液的配置10 mg胆//固//醇使用前加入517 μL提取液,振荡溶解后即50 μmol/mL的胆//固//醇标准溶液,2~8℃可保存4周。

3)标准溶液的稀释:取50 μmol/mL胆//固//醇标准液20 μL ,加入480 μL异丙醇充分混匀配制成2 μmol/mL的标准液。注意2 μmol/mL标准液最好现配现用,实验中每管需10 μL,为减小实验误差,故配制体积偏大

3. 操作步骤

1)样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

a. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约0.1 g组织,加入1 mL提取液)进行冰浴匀浆。8000 g,4℃离心10 min,取上清置冰上待测。

b. 细菌/细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1 mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300 w,超声2秒,间隔3秒,总时间3 min);然后 8000 g,4℃离心10 min, 取上清置于冰上待测。

c. 血清(浆)等液体样本:直接测定,若有沉淀请离心后取上清待测。

2)测定步骤

a. 可见分光光度计/酶标仪预热30 min以上,调节波长至500 nm,分光光度计蒸馏水调零。

b. 按需取出一定量的工作液,37℃水浴预热30 min。

c. 在1.5 mL EP管/96孔板按下表步骤加样

试剂名称(µL)

测定管

标准管

空白管

异丙醇

10

-

-

标准液

-

10

-

待测上清

-

-

10

工作液

190

190

190

充分混匀,室温静置15 min,反应完成后测定500 nm处吸光值A,分别记为A测定、A标准和A空白,ΔA测定=A测定-A空白,ΔA标准=A标准-A空白。空白管和标准只需测1-2注:若样本为血清,则空白管中的提取液(异丙醇)需要更换为蒸馏水进行实验。

  1. 总胆//固//醇含量计算

a. 血清(浆)中 FC 含量计算:

FC含量(μmol/dL)=C标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)×100=200×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)

b. 组织或细胞、细菌中 FC 含量计算:

1)按样本蛋白浓度计算FC含量(μmol/mg prot)=C标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A 空白)×V样总÷(Cpr×V样总)=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷Cpr

2)按样本质量计算FC 含量(μmol/g 质量)=C 标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)×V样总÷W=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷W

3)按细胞/细菌数量计算FC 含量(μmol/104 cell)=C 标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)×V样总÷N=(A测定-A 空白)÷(A标准-A空白)

标准液:标准液的浓度,2 μmol/mL;V 样总:加入提取液的体积,1 mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;100:单位换算系数,1 dL=100 mL;500:细菌或细胞数量,500万;N:细胞数量,以万计。

4. 实验实例:

 0.1 鼠肝脏加入 1 mL 提取液进行匀浆研磨,取上清后按照测定步骤操作,使用 96孔板测得A空白=0.046、A标准=0.354、A测定=0.127,按样本质量计算含量得:

FC含量(μmol/g 质量)=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷W =5.320 μmol/g 质量。

 

注意事项

 

  1. 如果样本吸光值大于1.2,建议将样本用提取液稀释后进行测定。

  2. 提取液中含有使蛋白变形的成分,故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。

  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

  2. 本产品仅作科研用途!



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