Yeasen/翌圣生物 品牌
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白细胞介素17（IL-17）家族蛋白包括六个成员（IL-17/IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E/IL-25和IL-17F），是分泌的结构相关蛋白，在C末端附近共享保守的胱//氨酸结折叠，但在N末端具有相当大的序列差异。除了作为非共价连接二聚体存在的IL-17B外，所有IL-17家族成员都是二硫键连接的二聚体。IL-17家族蛋白是诱导局部细胞因子产生并参与免疫功能调节的促炎细胞因子。IL-17调节NF-κB和促分裂原活化蛋白激酶的活性。这种细胞因子可以刺激IL6和环氧合酶-2（PTGS2/COX-2）的表达，并增强一氧化氮（NO）的产生。高水平的IL-17与几种慢性炎症性疾病有关，包括类风湿性关节炎、银屑病和多发性硬化症。
翌圣Mouse IL-17A/F Heterodimer ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定血清、血浆中的小鼠白介素17A/F 异二聚体蛋白(Mouse IL-17A/F Heterodimer)。特异性抗小鼠白介素17A/F 异二聚体蛋白抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的小鼠白介素17A/F 异二聚体蛋白与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中小鼠白介素17A/F 异二聚体蛋白的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
货号 | 98010ES48 / 98010ES96 |
规格 | 48 T / 96 T |
检测范围 | 46.88-3000 pg/mL |
检测方法 | 双抗夹心法 |
检测物种 | 小鼠 |
检测时长 | 4.5小时 |
灵敏度 | 12.18 pg/mL |
稀释线性 | 80 - 124% |
回收率 | 78 - 122% |
板内差 | 4.9% |
板间差 | 6.6% |
标曲数据
浓度（pg/mL） | 显色值 | 平均值 | 校准值 | |
3000 | 2.032 | 2.086 | 2.059 | 2.057 |
1500 | 1.263 | 1.283 | 1.273 | 1.283 |
750 | 0.738 | 0.784 | 0.761 | 0.744 |
375 | 0.381 | 0.430 | 0.406 | 0.413 |
187.5 | 0.203 | 0.237 | 0.220 | 0.224 |
93.75 | 0.112 | 0.125 | 0.118 | 0.121 |
46.88 | 0.068 | 0.069 | 0.069 | 0.067 |
0 | 0.011 | 0.010 | 0.010 | / |
数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。
标准曲线图
灵敏度检测
IL-17A/F Heterodimer的 检测限为12.18 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
精密度检测
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定6次，评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测20次，评估酶标板间的精密度。
项目 | 板内精密度 | 板间精密度 | ||||
样本 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
6 | 6 | 6 | 20 | 20 | 20 | |
平均值 | 1398.32 | 321.12 | 77.48 | 1403.42 | 325.91 | 77.59 |
标准差 | 87.86 | 16.57 | 2.44 | 105.95 | 19.59 | 4.86 |
变异系数（%） | 6.3 | 5.2 | 3.2 | 7.5 | 6.0 | 6.3 |
回收率检测
通过不同水平的IL-17A/F Heterodimer添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:
样本类型 | 平均回收率(%) | 范围（%） |
血清 | 97.4 | 90.7-106.1 |
血浆 | 99.9 | 78.4-122.6 |
细胞培养上清 | 92.1 | 82.7-107.5 |
稀释线性检测
血清稀释比例 | 平均期望值(%) | 范围（%） |
1:02 | 110.5 | 98.6-124.4 |
1:04 | 107.2 | 89.0-120.3 |
1:08 | 105.8 | 95.4-111.4 |
1:16 | 99.7 | 84.4-108.6 |
血浆稀释比例 | 平均期望值(%) | 范围（%） |
1:02 | 97.1 | 95.3-100.2 |
1:04 | 91.0 | 80.4-99.0 |
1:08 | 86.8 | 79.6-95.1 |
1:16 | 89.3 | 87.0-91.7 |
细胞培养上清稀释比例 | 平均期望值(%) | 范围（%） |
1:02 | 102.2 | 98.4-106.5 |
1:04 | 99.1 | 93.8-102.6 |
1:08 | 95.8 | 90.2-102.8 |
1:16 | 92.5 | 86.2-97.3 |
样本值
应用本试剂盒，检测若干健康志愿者的样本，志愿者的用药史不详。
样本类型 | 样本数目 | 平均值（pg/mL） | 样本值（pg/mL） |
血清 | 6 | n.d. | n.d. |
血浆 | 4 | 64.5 | n.d.-132.6 |
细胞培养上清 | 4 | n.d. | n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得46.88 pg/mL
测定特异性
本试剂盒识别天然和重组小鼠白介素17A/F 异二聚体蛋白。下述因子进行了特异性的评估，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
Recombinant human: | Recombinant Mouse: | |
GM-CSF | IL-10 | GM-CSF |
IFN-γ | IL-12 | IFN-γ |
IL-1α | IL-17A | IL-1α |
IL-1β | IL-18 | IL-1β |
IL-2 | IL-23 | IL-4 |
IL-4 | TNF-α | IL-6 |
IL-5 | IL-10 | |
IL-6 | TNF-α | |
问题 | 造成原因 | 解决方法 |
标曲不好 | 移液量不准确 | 检查移液器，按时校准，仔细操作，充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
稀释方法不恰当 | ||
显色值偏低 | 孵育时间太短 | 给予足够的孵育时间，样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
移液量不足或稀释不当 | 校准移液器和规范操作 | |
CV偏高 | 酶标板清洗不当 | 使用正确的洗涤工序；如果使用洗板机，检查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 | 准备新鲜洗液 | |
灵敏度较低 | 试剂盒储存不当 | 按照产品组分表进行保存。 |
