质粒小量提取试剂盒 质粒小提

D1100  质粒小量提取试剂盒 

100T  160.00   50T  100.00   用于质粒提取

保存：常温保存，复检期一年。 

本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料可以高效、专一地吸附 DNA ，可大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。从1–5ml大肠杆菌LB(Luria-Bertani)培养液中，可快速提取5–30μg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达85–90 % 。

本产品为生化试剂，科研级别，适用于各大专院校、科研院所的生物实验用。 - 使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等实验。

质粒小提产品说明：
  本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的 DNA 的原理特异
性提取质粒 DNA。  离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附 DNA，可大限度去除杂质蛋白及细
胞中其他有机化合物。  使用本试剂盒提取的质粒 DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接
和转化等试验。
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（将
试剂盒中提供的 RNaseA 全部加入） ，混匀，置于 2-8℃保存。如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在
室温下离心。 
质粒小提操作步骤:
1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集
到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250ul溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器彻
底悬浮细菌细胞沉淀。注意：如果菌块未*混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意：混匀一定要温和，以免污染
细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5 min，以免质粒受到破坏。
4、 向离心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。 12000rpm
离心10 min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。注意：溶液Ⅲ加入后
应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
5、将上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中） ，室温放置2min，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸
附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm离心2min， 将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟， 目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，
否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
9、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜*悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置
2min，12000rpm离心1min。
10、为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心1min。
质粒小提注意事项:
1.  使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊，如有混浊现象，可在 37℃水浴中加热几分钟，待溶液恢复澄
清后再使用。溶液Ⅱ  、溶液Ⅲ和漂洗液使用后应立即拧紧盖子。
2.  洗脱缓冲液体积不应少于 50ul，体积过小影响回收效率;洗脱液的 pH值对洗脱效率也有影晌，若需要用水做
洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，  pH值低于7. 0会降低洗脱效率，  DNA
产物应保存在-20℃，以防 DNA降解。
3.  如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，使用 5-10ml 过一晚培养物，同时按照
比例增加溶液Ⅰ  、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。
4. DNA浓度及纯度检测：得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。  得到的DNA
可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为 1 相当
于大约 50ug/ml双链DNA、 40ug/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，
而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响吸光值，但并不表示纯度低。
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