产品名称：α酮戊二酸脱氢酶（α-KGDH）测试盒规格

规格 : 50管/48样、100管/96样

测试方法:微量法、紫外分光光度法

货号：YS-01S6446

测定意义

α-KGDH（EC 1.2.4.2）广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中，是三羧酸循环调控关键酶之一，催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶。

测定原理

α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶生成琥珀酰辅酶、 二氧化碳和 NADH，NADH在340 nm有特征吸收峰，以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

【友情提示】：本产品仅供科研研究使用，不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失，请仔细阅读购买说明！

样品制备：

1）. 直接或稀释使用清亮无色中性液体样品，体积可达2.000ml。

2）. 过滤混浊溶液。

3）. 除去样品中的CO 2 。

4 ）. 加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。

5 ）. 调整酸性浅色样品的PH值至8.0，孵育约15分钟。

6 ）. 用空白样品做对照测定有色样品（如有必要调整PH值至8.0）。

7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。

8 ）. 压碎、搅匀固体或半固体样品，用水溶解提取。

9 ）. 用Carrez试剂将含有蛋白质的样品去蛋白。

10）.含脂肪的样品用热水提取。

操作步骤:

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.        每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.       依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

特点:

(1)应用广泛

由于各种各样的无机物和有机物在紫外可见区都有吸收,因此均可借此法加以测定。到目前为止,几乎化学元素周期表上的所有元素(除少数放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。

(2)灵敏度高

由于相应学科的发展,使新的有机显色剂的合成和研究取得可喜的进展,从而对元素测定的灵敏度大大提高了一步。特别是由于多元络合物和各种表面活性剂的应用研究,使许多元素的摩尔吸光系数由原来的几万提高到几十万。相对于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和准确度一致*是比较高的。不但在实际工作中光度法被广泛采用,在标准参考物质的研制中,它更受重视,很多光度分析法已制定成为标准方法。

(3)选择性好

目前已有些元素只要利用控制适当的显色条件就可直接进行光度法测定,如钴、铀、镍、铜、银、铁等元素的测定,已有比较满意的方法了。

(4)准确度高

对于一般的分光光度法来说,其浓度测量的相对误差在1-3%范围内,如采用示差分光度法测量,则误差往往可减少到千分之几。

(5)适用浓度范围广

可从常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(经预富集后)。

(6)分析成本低、操作简便、快速

Anti-phospho-c-Raf (Ser338) /FITC 荧光素标记磷酸化原癌基因c-Raf抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rabbit Anti-Bovine IgG 兔抗IgG (亲和层析纯化)Multi-class antibodies规格： 1mg

GDNF家族受体α-1抗体 Anti-GFRα-1/GDNF 0.1ml

Rabbit Anti-chicken IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG 0.1ml

FAR2 英文名称： 脂肪酰A还原酶2抗体 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Smad1(Ser206) 磷酸化细胞信号转导分子Smad-1抗体 规格 0.1ml

Rabbit Anti-Bovine IgG 兔抗IgG (亲和层析纯化)Multi-class antibodies规格： 1mg

PHD3 (Egln3; HIF-prolyl hydroxylase 3) 脯氨酸羟化酶(多肽)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-B7-DC/CD273 程序性死亡配体2抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-ADRB2(Ser346) 磷酸化肾上腺素能受体β2抗体 规格 0.1ml

Mast Cell Tryptase 浓缩液 0.1ml 进口分装

USE1 英文名称： 囊泡转运蛋白Use1抗体 0.2ml

CHODL 英文名称： 软骨凝集蛋白CHODL抗体 0.1ml

Anti-B7-DC/CD273 程序性死亡配体2抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

SKP1 英文名称： S期激酶相关蛋白1抗体 0.2ml

alpha Elastin 英文名称： α弹性蛋白抗体 0.1ml

转移生长因子–β受体1抗体 Anti-TGF-βR1/ALK 0.1ml

Anti-TM/FITC 荧光素标记血栓调节蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-LAT (Tyr191) 磷酸化T细胞活化连接蛋白抗体 规格 0.1ml

OPN 骨桥蛋白(多肽抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg
α酮戊二酸脱氢酶（α-KGDH）测试盒规格乙酰基乙酰苯(>99%,BR)五味子酯甲CY5蛋白标记试剂盒

溴化乙酰胆(>98%,BR)五味子乙SULFORHODAMINE蛋白标记试剂盒

酮肟(>98%,BR)烟酰抗体/蛋白HRP标记制备试剂盒

化乙酰胆(>98%,BR)西红花苷抗体/蛋白AP标记制备试剂盒

酸性蓝29(>50%，Ind Grade)西红花苷I抗体/蛋白生物素标记制备试剂盒

酸性蓝40(>50%,BS)西红花苷II抗体蛋白质A标记制备试剂盒

酸性品红6B(>50%,BS)桑色素病HRP标记制备试剂盒

吖啶盐酸盐(>98%，BS)D-(-)-奎宁酸蛋白电泳2倍样品处理液