γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性测定试剂盒
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产品简介

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详细介绍

我司供应的生化检测试剂盒,仅供科研使用。

产品名称

测定方法

规格

货号

γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性测定试剂盒

微量法、可见分光光度法

100管/96样 、50管/48样

YS-01J6340

商品介绍:

测定意义:

γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶,催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解,产生谷氨酸盐,在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。

测定原理:

γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸,生成对硝基苯胺,在405nm有特征光吸收;通过测定405nm光吸收增加速率,来计算γ-GT酶活性。

自备仪器和用品:

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水

通用规则:

1、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

2、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

3、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。

4、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。

5、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。

6、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。

7、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。

8、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加*。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

9、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。

10、底物是光敏感的,要在临用前现配。

实验通用规则:

1、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

2、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

3、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。

4、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。

5、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。

6、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。

7、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。

8、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加*。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

9、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。

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测定步骤:

1.加样

1. 除包被外都需45度加样

2.加样体积要准确

3.管底加样,不能加在管壁上

4.加样时不能产生气泡

2.温浴

1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。

2.各ELISA板不应叠在一起。

3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。

4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。

3.洗涤

1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却 是决定实验成败的关键。

2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。

4.读板

1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般 可采用目视比色。

2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。

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