我司供应的生化检测试剂盒，仅供科研使用。

商品介绍：

测定意义

辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循环（TCA）的主要氢受体，生成的NADH经呼吸电子链（ETC）传递把电子交给氧，在合成ATP的同时，形成大量的ROS，同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外，NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。

测定原理

分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH，NADH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT）为甲瓒，在570nm下检测吸光值；而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH，进一步采用MTT还原法检测。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

通用规则：

1、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

2、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

3、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。

4、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。

5、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

6、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。

7、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

8、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加*。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

9、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。

10、底物是光敏感的，要在临用前现配。

实验通用规则：

1、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

2、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

3、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。

4、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。

5、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

6、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。

7、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

8、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加*。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

9、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。

10、底物是光敏感的，要在临用前现配。

CNE1, 人鼻咽癌细胞系     Human

HT-29, 人结肠癌细胞     Human

T24, 人膀胱癌细胞     Human

5-8F, 人高转移鼻咽癌细胞系     Human

HCT116, 人结直肠癌细胞     Human

LncaP, 人前列腺癌细胞     Human

6-10B, 人鼻咽癌细胞系     Human

lovo, 人结肠癌细胞     Human

DU 145, 人前列腺癌细胞     Human

Hep-2, 人喉癌细胞系     Human

MDA-MB-231, 人乳腺癌细胞     Human

HL-60, 人早幼粒白血病细胞     Human

CaEs-17, 人食管癌细胞株     Human

MG-63, 人骨肉瘤细胞     Human

kasumi-1, 人白血病细胞株     Human

RBE, 人肝胆管癌细胞     Human

MiaPaCa-2, 人胰腺癌细胞     Human

KM3, 人多发性骨髓瘤细胞     Human

QGY-7701, 人肝癌细胞     Human

PANC-1, 人胰腺癌细胞     Human

Girdin    肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体     根霉属的菌

AKAP2    蛋白激酶A2抗体     戴尔根霉

AT2R2    血管紧张素Ⅱ受体2抗体     科恩根霉

ASH1L    ASH1蛋白抗体     华根霉

AADACL2    芳香乙酰胺脱乙酰基酶样蛋白2抗体     白腐菌

AAMP    血管内皮细胞迁移蛋白抗体     荨麻青霉

AKR1B10    醛糖还原酶相关蛋白质抗体     小刺青霉

AKR1C2    胆汁酸结合蛋白DDH2抗体     娄地青霉

ANGPTL3    血管生成素样蛋白3抗体     产紫青霉

Acylglycerol Kinase    甘油酯激酶线粒体抗体     特异青霉

phospho-alpha Adducin(Ser726)    磷酸化内收蛋白a1抗体     淡紫青霉

ATG16L2    自噬体ATG16L2蛋白抗体     岛青霉

ACPT    睾丸酸性磷酸酶抗体     灰黄青霉

Acid Phosphatase    酸性磷酸酶抗体     园弧青霉=桔灰青霉

AKIP    极光激酶A相互作用蛋白1抗体     顶青霉

APOL6    载脂蛋白样蛋白6抗体     黄绿青霉

ARTS    凋亡相关蛋白TGFb信号抗体     产黄青霉

A2LD1    A2LD1蛋白抗体     阿达青霉

辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒A4GNT    α1,4-N-乙酰葡糖胺转移酶α4Gn-T抗体     拟青霉

AADAC    芳香乙酰胺脱乙酰基酶抗体     棉铃虫拟青霉

AADACL4    芳香乙酰胺脱乙酰基酶样蛋白4抗体     玫烟色拟青霉

AASDHPPT    氨基乙二酸半醛脱氢酶磷酸泛酰巯基乙胺转移酶抗体     露湿漆斑菌

测定步骤：

1.加样

1. 除包被外都需45度加样

2.加样体积要准确

3.管底加样，不能加在管壁上

4.加样时不能产生气泡

2.温浴

1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。

2.各ELISA板不应叠在一起。

3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。

4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。

3.洗涤

1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。

2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。

4.读板

1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。

2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。