细胞名称：人风湿性关节滑膜成纤维细胞永生化

培养条件：成纤维细胞培养体系  

生长状态：贴壁生长

备注：原代细胞永生化，提供免疫荧光鉴定报告

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人源 甲状腺微血管内皮细胞细胞培养问题----沉淀

当排除了污染后，细胞培养基的浑浊通常可以解释为金属、蛋白质和其他培养基成分的沉淀。沉淀物可能对细胞健康有害，因为他们可能通过整合作用等过程去除营养物质和其他需要的成分，从而改变培养基成分。

沉淀的原因

温度变化

温度是细胞培养中沉淀的主要原因之一。当暴露于端温度变化时，高分子量的血浆蛋白会从溶液中沉降。热失活和冻融循环会促进蛋白质的变性和沉淀。由于液体或复溶培养基在每次使用之间保持冷藏状态，盐可能会沉淀出来，特别是10倍或其他浓缩液中析出。

失水引起的浓度变化

如果培养基存在蒸发，培养基组分（包括盐）的浓度将增加。在培养基的表面特别容易形成晶体沉淀。

钙盐

在制备无血清培养基时，组分的添加顺序可能会导致不溶性分子的形成。钙盐特别容易沉淀。例如，CaCl2和MgSO4在溶液中反应形成CaSO4晶体。高压灭菌和pH值不稳定可能会加剧这一问题。

金属元素补充剂

铜、铁和锌金属元素是细胞生长所必需的，是无血清培养基的重要补充剂。其他血清成分的缺失可能会导致这些金属在培养基中沉淀，产生一个对细胞有毒的环境。铜和锌在氧化条件下更加容易沉淀。

污染

培养基浑浊可能是细菌或真菌污染造成的。

细胞培养中对沉淀的故障排除

温度

有关培养基的最佳储存和处理，应参阅制造商指南。避免重复的冻融循环。

钙盐

在逐个加入其他培养基组分之前，先将CaCl2单独溶解在去离子水中。

湿度

确保烧瓶和培养皿不存在蒸发。监测培养箱的湿度，密封培养器皿，防止干燥。

其他金属

加入铁结合蛋白转铁蛋白可防止铁在培养基中沉淀。

污染

丢弃被污染的细胞并对培养箱体进行消毒。遵循良好的实验室措施以避免污染。

有目的的沉淀

尽管通常在细胞培养中不希望有沉淀，但是沉淀可以用作上清液中蛋白质的纯化策略。例如，硫酸铵沉淀法有时被称为“盐析”技术，用于从杂交瘤上清液或血清中纯化抗体。

细胞培养做为生物学研究最基础的技术之一，可以说是渗透科研界的方方面面。工欲善其事，必先利其器。细胞好不好，就看你懂不懂细胞培养的各种技术了。

❤  原代培养

从原代组织中分离细胞的常用的方法是酶解法（胰蛋白酶和胶原酶）。

用无菌的解剖刀和剪子将组织剪成3~4mm小片，用平衡液（无钙镁离子）清洗组织碎片后去除上清液，并加入0.25%的胰蛋白酶（Trypsin，100mg组织加入1ml胰蛋白酶）或者胶原酶（Collagenase，50~200单位/ml），孵育4-18h。离心取上清后，用平衡液清洗几次后，用*培养基悬浮细胞，进行培养。

❤  传代培养

依据细胞生长的特点，传代方法有3种：

1. 悬浮生长细胞传代（离心法）

将悬浮细胞离心（1000 rpm， 3 min）去上清，收集沉淀物加新培养基，混匀后进行传代培养。

2. 半悬浮生长细胞传代（直接吹打法）

3.此类细胞（如Hela细胞）部分贴壁，但黏贴不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁上脱落下来，进行传代。

3. 贴壁生长细胞传代（酶消化法）

去除瓶内培养液后，加入1-2ml 0.25%的胰蛋白酶液（以消化液覆盖整个瓶底为准）37℃静置2-10min（显微镜下动态监测）。移去蛋白酶液，加入培养液反复吹打瓶壁细胞，离心将细胞沉淀用培养液制成细胞悬液。吸取1/10—1/40细胞悬液，接种于含有适量新鲜培养液的新培养瓶中进行传代培养。

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细胞培养是一个不断进步的过程，在平时做好积累，量变才会有质变。

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