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2×Lab FL PCR Master Mix
产品货号：FL0201
储存条件：-20°C 保存2年。短时间（1个月内）使用可以置4°C。
产品说明
本产品包含Lab LastLong DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×。 使用时只需加入模板、引物，并补足水至Mix终浓度为1×即可。本制品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。PCR产物为3，端带A头，纯化后可直接用LABLEAD LabpO TOPO TA系列载体（货号：PA0101、PA0102）克隆。
产品特点
1、超快的扩增速度：延伸速度可以达到5-10sec/kb，最短半小时完成PCR。
2、突出的长片段扩增能力：可扩增高达10kb的长片段（包括人类基因组此类的复杂模板）。
3、良好保真性：保真度是taq的3倍以上。
4、强大的扩增能力：产量高，对于一些有特殊结构的复杂模板和GC含量高模板有良好效果。
建议PCR 体系设置
Component | 25 μl Reaction | 50 μl Reaction | Final Concentration |
2x Lab FL PCR mix | 12.5 μl | 25 μl | 1 × |
Forward Primer(10 μM) | 0.5 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer(10 μM) | 0.5 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | as required | as required | |
ddH2O | up to 25 μl | up to 50 μl |
参考模板用量（50 μl反应体系）
质粒：0.1-10ng；细菌基因组：10-100ng；人类基因组：50-150ng；cDNA：1-5μl from RT reaction。
建议PCR循环条件
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initial denaturation | 94oC | 2-3 min | |
Denaturation | 94oC | 10 s | 25-35 cycles |
Annealing | 55oC | 10-15s | |
Extension | 72oC | 10 s/ kb | |
Final Extension | 72oC | 1-5 min | |
4-8oC | Hold |
注意事项
1.本品扩增速度极快， 质粒和简单基因组等简单模板可以尝试5s/kb延伸速度并采用减少循环数以进一步缩短PCR时间；长片段（大于等于3kb）或者复杂模板产量较低应采用15-20s/kb延伸速度或者采用较多循环数。
2.Lab FL产量较低时可尝试采用较长的延伸时间（如20s/kb）和循环数（如35个）可以提高产物产量。
3.对于GC含量很高的模板，短片段预变性和变性温度可以提高到98 oC和/或适当延长变性时间。长片段为了避免DNA损伤不应该提高变性温度，应该适当延长预变性时间到5min.，变性时间可以延长5-10s。
4.如果扩增模板GC含量高或者模板复杂扩增效果不佳时，可在反应混合物中加入DMSO到终浓度1%-8%，按照1%梯度增加摸索best浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0-1.7 M。并采用降落PCR（Touchdown PCR）
