High T7 RNA Polymerase

货号：T0125

储运条件 ：-20℃

产品组成

产品简介

本产品是经基因工程改造的热稳定T7 RNA聚合酶，对噬菌体T7启动子序列具有高度特异性，跟野生型噬菌体T7 RNA聚合酶相比，它可在更高的温度下进行反应。High T7 RNA Polymerase可在37~52℃条件下进行高效的体外转录。

活性定义

1活性单位(U)是指在50℃ 1 h内使1 nmol ATP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

适用范围

1. 合成单链RNA,包括mRNA,siRNA, gRNA等各类RNA的前体。

2. 合成标记或未标记的高特异性RNA探针。

3. 利用帽子类似物合成加帽的mRNA。

质量控制

蛋白纯度检测

本品经SDS-PAGE检测纯度≥95%。

核酸内切酶残留检测

将酶液与超螺旋质粒DNA在37℃温育4 h，通过DNA电泳检测质粒无变化。

DNase 残留检测

将酶液与双链DNA 底物在 37℃温育 16 h，通过 DNA 电泳检测双链DNA底物无变化。

RNase残留检测

将酶液与  RNA 在 37℃温育 1 h，通过电泳检测 RNA 无降解。

功能检测

体外转录合成实验，通过 RNA 电泳可以检测到目的条带。 

使用方法

推荐反应体系（20 μl）

 注:建议加完Nuclease-Free Water，再加CTP/GTP/ATP/UTP。

推荐反应条件

50℃反应 1 h。

反应结束后，可向上述 20μl 反应液中加入1μl dsDNase，37℃孵育15 min用于去除DNA模板。

注意事项

1. 模板 DNA 的纯度对体外转录反应至关重要。质粒DNA抽提过程中引入的RNase A残留会显著影响转录RNA的质量，建议使用OD260/280为1.8~2.0的高纯度 RNase-free 质粒。

2. 模板DNA可通过线性化环状质粒或PCR 获得。模板DNA上游需含有T7启动子序列，下游为平末端或编码链5' 末端突出。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及口罩进行实验操作。