一、新物体识别介绍

对象位置任务（OLT）和新颖物体识别任务（NORT）是两种常用的有效行为任务，它们用于揭示参与记忆的特定脑区的功能和相对健康状况。虽然这两种测试都利用了老鼠对新颖性的天生偏好来揭示对先前遇到的物体的记忆，但OLT主要评估空间学习，这在很大程度上依赖于海马体活动。相比之下，NORT评估的是非空间学习的物体识别，这依赖于多个脑区。

OLT（对象位置测验）是一种简单而有效的测试，可提供海马依赖性空间记忆的度量。该任务依赖于动物对新奇性的固有偏好，而不需要额外的外部强化，因此通常可以避免与不同情绪反应相关的复杂性。该协议包括让小鼠适应旷场测试区域，然后允许其与空间环境线索相关的2个物体进行探索。然后，将小鼠从测试区域移出，在延迟（试验间隔或ITI）期间，移动其中一个物体的位置。ITI结束后，将小鼠重新引入测试区域，并允许其自由探索。总体而言，小鼠更喜欢新奇性，如果它们记得初始暴露时物体的位置，它们将花更多时间调查移动的物体。海马损伤的动物在空间背景学习方面存在缺陷，因此在新位置不会对物体表现出偏好。

OLT可以独立使用，也可以与另一种依赖多个脑区神经活动的记忆测试相结合，即新对象识别任务（NORT）。NORT与OLT相同，直到测试阶段，其中一个物体被一个新物体替换，而不是被移到新位置。与OLT一样，记得物体的小鼠会自发地更喜欢调查新物体。与强烈依赖海马底物的对象位置记忆不同，对象识别记忆似乎依赖于多个脑区，并且海马的参与尚未解决。许多研究报告称，海马损伤或失活不会影响新对象的偏好，而其他研究发现相反。然而，它仍然是评估啮齿动物一般记忆功能的常用任务。

二、新物体识别实验protocol

1.测试前一周：

让小鼠熟悉进行行为测试的人员

每天处理6至9周龄的成年雌雄C57Bl/6小鼠1分钟，持续3-5天。

2.第一天：习惯化会话

2.1将小鼠分为4组，将它们移到单独的干净饲养笼中。

2.2将它们带入测试房间，让它们至少适应测试房间30分钟。

2.3当适应完成并且实验人员准备好开始时，开始使用行为学分析软件（如VisuTrack）录制并分析视频。

2.4将每只小鼠放置在场地（每个场地一只小鼠）面向释放角的墙壁。

2.5让小鼠自由探索场地6分钟。

2.6停止录制视频。

2.7在试验间隔期间将小鼠返回它们的干净固定笼中。

2.8使用动物设施推荐的清洁方法清洁所有场地，例如用70%的酒精擦拭以最小化嗅觉线索。

重复步骤2.3–2.8再进行两次，为每只小鼠进行总共3次习惯化会话。

2.9将所有小鼠返回它们的饲养笼中。

2.10使用动物设施推荐的清洁方法（如使用70%的乙醇擦拭）清洁所有旷场，以最大限度地减少第二天使用前的嗅觉线索。

3.第二天：训练测试

3.1 24小时后，将同一组老鼠带入测试室，并让它们适应测试室至少30分钟，和前一天习惯化训练前的操作一样。

3.2 使用2个放置在旷场中的物体进行训练试验。

3.3 使用双面胶带，将物体固定在两个非释放角落的6×6厘米处，使它们在旷场中平衡并且不会被小鼠移动。

3.4 开始使用行为学分析软件（如VisuTrack）录制并分析视频。

3.5 将每只老鼠面向释放角落的墙壁放置，和前一天习惯化训练前的操作一样

3.6 允许老鼠自由探索旷场和物体10分钟。

3.7 停止录制视频。

3.8 将老鼠放回它们的干净保持笼子中，间隔时间（ITI）为20分钟。

3.9 使用动物设施推荐的清洁方法（如使用70%的乙醇擦拭）清洁所有旷场和物体，以最大限度地减少嗅觉线索。

4 第二天:进行OLT

训练测试后进行OLT。

将训练试验中使用的一个物体移动到新的非释放角落，并使用双面胶带将物体固定在那个角落的每个墙壁距离6厘米的位置。

注意：只需要移动一个物体，另一个物体应该和训练试验期间的位置一样，保持不变。

4.1使用行为学分析软件（如VisuTrack）录制并分析视频。

4.2将每只老鼠面向释放角落的墙壁放置。

4.3允许老鼠探索物体10分钟。

4.4停止录制视频。

4.5将老鼠放回它们的干净保持笼子中，间隔时间（ITI）为20分钟。

4.6 使用动物设施推荐的清洁方法（如使用70%的乙醇擦拭）清洁所有旷场和物体，以最大限度地减少嗅觉线索。

5.进行NORT

OLT结束后进行NORT。

5.1用一个新的物体替换OLT期间未移动的物体，并使用双面胶带将这个新物体固定在角落的两面墙壁距离6厘米的位置。

5.2使用行为学分析软件（如VisuTrack）录制并分析视频。

5.3将每只老鼠面向释放角落的墙壁放置。

5.4允许老鼠探索物体10分钟。

5.5停止录制视频。

5.6将老鼠放回它们的饲养笼子。

5.7使用动物设施推荐的清洁方法（如使用70%的乙醇擦拭）清洁所有旷场和物体，以最大限度地减少下次使用前的嗅觉线索。

三、 分析行为测试数据

注意：视频分析理想情况下应由至少两名独立的实验人员完成。

打开视频文件。

在屏幕上应用一个透明圆圈，围绕每个物体提供2厘米的边界，以帮助确定主动探查。使用在旷场放置尺子的视频文件图像来校准这个距离。

观察老鼠的行为，并记录老鼠主动探查物体的时间，包括它的鼻子指向物体，距离该物体最大2厘米。

记录老鼠开始探查物体的时间点和停止探查物体的时间点。并计算老鼠探查每个物体的累积时间。

计算总探查时间的百分比 =（与新位置或物体的时间）/（与新位置或物体的时间 + 与熟悉位置或物体的时间）×100

注意：超过50%的值表明对新位置或物体的探查更多。

计算区分指数 =（与新位置或物体的时间 - 与熟悉位置或物体的时间）/（与新位置或物体的时间 + 与熟悉位置或物体的时间）

注意：正值表明更多时间用于探查新物体。区分指数为零表示与两个物体花费相同的时间。

使用t检验或ANOVA等统计分析方法，根据比较的群体数量适当地图形表示结果并完成统计分析。