脱氢抗坏血酸还原酶活性测定试剂盒 维生素C

测定意义：
   DHAR 存在于线粒体、细胞质和叶绿体中。DHAR 催化 GSH 还原 DHA 生成 AsA，调控细胞 AsA/DHA 比值，是抗坏血酸-谷胱*肽氧化还原循环的关键酶。提高植物体内的DHAR 活性，可提高植物食品中 AsA 含量，进而提高植物食品的营养品质。

测定原理：
   DHAR 催化 GSH 还原 DHA 生成 AsA， 通过测定 DHA 被还原量可计算得 DHAR 活性。

实验中所需仪器及设备：
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1ml 石英比色皿、可调式移液器、双蒸水。

试剂组成和配制：

试剂一×1 瓶，稀释液一×1 支，临用前配制，取少量双蒸水充分溶解试剂一后，加稀释液一
0.381ml，再继续加双蒸水定容 50ml ；
试剂二×1 瓶，加 50ml 双蒸水充分溶解；
试剂三×1 支，临用前加 5.5ml 双蒸水充分溶解；
试剂四×1 瓶，临用前加双蒸水 5.5ml 充分溶解。

样品前处理：
   称取约 0.1g 样品，加试剂一 1ml，冰上充分研磨，16000g 4℃离心 20min，取上清。

DHAR 测定操作：

按下表操作：

迅速混匀后，于 265nm 比色，记录 30s 和 150s 的吸光值，空白管和测定管吸光值分别记为
A1、A2 和 A3、A4。

DHAR 活性计算：
    DHAR 活力单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol AsA 为 1U。
计算公式：DHAR(U/mg prot)= △A265/min×[10 6 /(ε•d)]×(V 总/V 样)/Cpr
= [(A4-A3)-(A2-A1)÷2]×[10 6 ÷(5.42×10 4 ×1)]×(1/0.1)÷Cpr
=92.25×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr；
   △A265/min =(△A 测定管-△A 空白管)/2，即每分钟吸光值变化；ε :产物在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×10 4 mol/L • cm，106：摩尔分子换算成微摩尔分子；d：比色杯光径（cm） ；V 总：反应总体积（ml） ，V 样：所用样品体积（ml） ；Cpr：蛋白浓度（mg/ml） 。

注意事项:

试剂一、试剂三和试剂四均需临用前配制。
样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力。
稀释液一有挥发性和刺激性，吸取时好戴手套和口罩，好用移液管吸取。

相关文献：

《Exogenous 24-Epibrassinolide alleviates oxidative damage from copper stress in grape (Vitis vinifera L.) cuttings》 作者:Ya-li Zhou,Su-fang Huo,Li-ting Wang,Jiang-fei Meng,Zhen-wen Zhang,Zhu-mei Xi 期刊:Plant Physiology and Biochemistry 影响因子:3.404 PMID:30099273

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