SOLARBIO/索莱宝 品牌
生产厂家厂商性质
北京市所在地
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体50 mL×1瓶(自备) | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | - | 2-8℃保存 |
试剂五 | 液体6 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂六 | 液体10mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 粉剂×1支 | 2-8℃保存 |
试剂二:*50 mL自备。
试剂四:提供125 mL空瓶一个;将试剂三:H2O =9 mL:91 mL混匀,现用现配,2-8℃保存半年。
标准品:10 mg支链淀粉。临用前加入0.1 mL无水乙醇和0.9 mL试剂三,混匀后封口膜封口,沸水浴至溶解,即10 mg/mL的支链淀粉,2-8℃保存半年。
称取0.005g烘干样本,加入1mL试剂一,充分匀浆;
80℃水浴提取30min,3000g,25℃离心5min,弃上清,留沉淀;
在步骤2沉淀中加入1mL试剂二(*)振荡 5min;3000g,25℃离心5min,弃上清,留沉淀;
在步骤3沉淀中加入5mL试剂四充分溶解,90℃水浴10min,冷却后3000g,25℃离心5min,取上清待测。
分光光度计预热30min以上,调节双波长至530nm和755nm,蒸馏水调零。
标准液的稀释:将10 mg/mL的标准溶液用试剂四稀释至0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125 mg/mL标准溶液待测。
标准液稀释可参考下表:
序号 | 稀释前浓度(mg/mL) | 标准液体积(µL) | 试剂四体积(µL) | 稀释后浓度(mg/mL) |
1 | 10 | 100 | 1900 | 0.5 |
2 | 0.5 | 800 | 200 | 0.4 |
3 | 0.4 | 500 | 500 | 0.2 |
4 | 0.2 | 500 | 500 | 0.1 |
5 | 0.1 | 500 | 500 | 0.05 |
6 | 0.05 | 500 | 500 | 0.025 |
7 | 0.025 | 500 | 500 | 0.0125 |
操作表:(在1.5mL离心管中依次加入下列试剂)
试剂名称 | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本(µL) | 200 | - | - |
标准溶液(μL) | - | 200 | - |
蒸馏水(µL) | - | - | 200 |
试剂五(µL) | 75 | 75 | 75 |
试剂六(µL) | 50 | 50 | 50 |
蒸馏水(µL) | 675 | 675 | 675 |
充分混匀,测定530nm和755nm处的吸光值,530nm下的测定管、标准管、空白管分别记为A测定、A标准和A空白,755nm下的分别记为A’测定、A’标准、A’空白,计算ΔA测定=(A测定-A空白)-(A’测定-A’空白),ΔA标准=(A标准-A空白)-(A’标准-A’空白)。标准曲线和空白管只需测定1-2次。 |
标准曲线的建立
支链淀粉含量(mg/g 质量)=x×V样总÷W=5x÷W
反应后建议在20min内检测完成防止褪色。
如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。
取0.01g红豆于研钵中研碎,加入1mL试剂一,进行样本处理取上清3倍稀释后按照测定步骤操作,测得计算ΔA测定=(A测定-A空白)-(A’测定-A’空白)=(0.370-0.045)-(0.233-0.015)=0.107,带入标准曲线y=0.7564x-0.0006计算x=0.1423,按样本质量计算含量得:
支链淀粉含量检测试剂盒