胞浆异柠檬酸脱氢酶（ICDHc）测试盒胞浆异柠檬酸脱氢酶（ICDHc）测试盒

胞浆异柠檬酸脱氢酶（ICDHc）活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
货号：BC0400
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：用时加入50 mL提取液溶解；

2. 试剂二：用时每支加275 μL双蒸水充分溶解备用；

3. 试剂三：用时每支加275 μL双蒸水充分溶解备用；

4. 工作液配制：将试剂一、试剂二、试剂三按85：1：1的比例混合，现用现配。

产品说明：
ICDHc（EC 1.1.1.42）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化异柠檬酸脱氢脱羧生成α-酮戊二酸，同时还原NADP⁺生成NADPH。ICDHc是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种NADPH重要来源，在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。
利用ICDHc催化NADP⁺还原成NADPH反应，在340nm下测定NADPH浓度的增加，即可反映ICDHc活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
“具体操作步骤详见“产品资料”附件”
注意事项：
1、若A2-A1大于0.5，需将酶液用提取液稀释，使A2-A1小于0.5，可提高检测灵敏度。若初始值A1大于0.5可尝试将酶液用提取液稀释。
2、实验时，试剂二、试剂三和样本在冰上放置，以免变性和失活；工作液37℃水浴放置。
3、比色皿中反应液的温度必须保持37℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
4、最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。
实验实例：

1. 取0.1g稗草，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，然后8000g 4℃离心10min，取上清，之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA=A2-A1=0.240-0.224=0.016，按样本质量计算酶活得：

ICDHc活性（U/g 质量）=1608×ΔA÷W=257.28 U/g 质量。

1. 取0.1g小鼠肺部组织，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，然后8000g 4℃离心10min，取上清稀释5倍，之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA=A2-A1=0.253-0.141=0.112，按样本质量计算酶活得：

ICDHc活性（U/g 质量）=1608×ΔA÷W×5=9004.8 U/g 质量。

1. 取小鼠血清样本直接检测，测得计算ΔA=A2-A1=0.225-0.2=0.025，按血清计算得：

ICDHc活性（U/mL）=1608×ΔA=40.2 U/mL。
参考文献：

1. Miake F, TORIKATA T, KOGA K, et al. Isolation and characterization of NADP+-specific isocitrate dehydrogenase from the pupa of Bombyx mori[J]. The Journal of Biochemistry, 1977, 82(2): 449-454.

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