6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
货号: BC0260
规格: 50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：用时每支加650 μL双蒸水充分溶解备用。

2. 试剂三：用时每支加650 μL双蒸水充分溶解备用。

3. 工作液配制：临用前将试剂一、试剂二、试剂三以15：0.2：0.2比例混合。

产品说明：
G6PDH（EC 1.1.1.49）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是磷酸戊糖途径的关键酶，催化6-磷酸葡萄糖氧化为6-磷酸葡萄糖酸内酯，同时将NADP⁺还原为NADPH，供生物合成及维持细胞内的还原状态用。因此6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。
G6PDH催化NADP⁺还原生成NADPH，在340nm下测定NADPH增加速率。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
“具体操作步骤详见“产品资料”附件”
注意事项：
1、实验时，样本在冰上放置，以免变性和失活。试剂一37℃水浴放置。
2、比色皿中反应液的温度必须保持37℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
3、最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。
4、若样本测定初始值（0s）大于0.5而ΔA测定小于0.1，可将样本稀释后再行测定。



实验实例：

1. 称取约0.1g脾，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定管= A2测定-A1测定=1.234-0.479=0.755，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.034-0.022=0.012，按样本质量计算酶活得：

G6PDH活性（U/g 质量）=643×（ΔA测定-ΔA空白）÷W=643×0.734÷0.1=4777.49 U/g 质量。
相关发表文献：

1. Yang Y, Liu W, Li D, et al. Altered glycometabolism in zebrafish exposed to thifluzamide[J]. Chemosphere, 2017, 183: 89-96.

2. Wu S, Wang H, Li Y, et al. Transcription factor YY1 promotes cell proliferation by directly activating the pentose phosphate pathway[J]. Cancer research, 2018, 78(16): 4549-4562.

3. Fan X, Hou T, Jia J, et al. Discrepant dose responses of bisphenol A on oxidative stress and DNA *ation in grass carp ovary cells[J]. Chemosphere, 2020, 248: 126110.

参考文献：-

1. Anderson B M, Wise D J, Anderson C D. Azotobacter vinelandii glucose 6-phosphate dehydrogenase properties of NAD-and NADP-linked reactions[J]. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Protein Structure and Molecular Enzymology, 1997, 1340(2): 268-276.

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