ATP含量检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0300
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 提取液低温条件下，可能有结晶析出，放于60℃水浴加热溶解即可，不影响使用。

2. 试剂二：临用前加入7 mL蒸馏水充分溶解，可加热促进溶解，2-8℃可保存4周；

3. 试剂四：临用前取1支加入0.2mL蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融；

4. 试剂五：临用前加入3.2 mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；

5. 试剂六：临用前取1支加入0.25 mL蒸馏水备用，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融；

6. 标准品：5 mg ATP。临用前加入0.826 mL蒸馏水配成10 μmol/mL的ATP标准溶液，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；

7. 工作液的配制：临用前请按试剂二(mL)：试剂三(mL)：试剂四(mL)：试剂五(mL)：试剂六(mL)=1：1：0.1：0.4：0.1的比例配制（2.6mL，约10T的量），现配现用。

产品说明：
ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。

HK催化葡萄糖和ATP合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，NADPH和ATP含量成正比，以此反应ATP含量。

技术指标：
检出限：0.0023 μmol/mL
线性范围：0.0390625-2.5 μmol/mL

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、低温离心机、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水、冰和氯仿。
“具体操作步骤详见“产品资料”附件”
注意事项：

1. 加入提取液离心后的上清若为浑浊为正常现象。

2. 如果吸光值大于1.1，建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。注意计算公式中乘以稀释倍数；如果吸光值过低或接近空白，建议加大样本量后进行测定，注意同步修改计算公式。

实验实例：

1. 取0.1g兔肺脏加入1mL提取液进行冰浴匀浆，10000g 4℃离心10min，取上清至另一EP 管中，加入500μL的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心3min，取上清，置冰上按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A2测定-A1测定=0.083-0.066=0.017，ΔA标准=A2标准-A1标准=0.430-0.191=0.239，按样本质量计算含量得：

ATP含量（μmol/g 质量）=0.625×ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.625×0.017÷0.239÷0.1=0.445 μmol/g 质量。

1. 取0.1g稗草加入1mL提取液进行冰浴匀浆，10000g 4℃离心10min，取上清至另一EP 管中，加入500μL的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心3min，取上清，置冰上按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A2测定-A1测定=0.511-0.479=0.032，ΔA标准=A2标准-A1标准==0.430-0.191=0.239，按样本质量计算含量得：

ATP含量（μmol/g 质量）=0.625×ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.625×0.032÷0.239÷0.1=0.837 μmol/g 质量。

1. 取兔血清0.1mL 加入1mL 提取液，充分震荡，10000g，4℃离心10min；取上清液至另一EP 管中，加入500μL的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心3min，取上清置冰上检测，ΔA测定=A2测定-A1测定=0.051-0.038=0.013，ΔA标准=A2标准-A1标准=0.430-0.191=0.239，按液体体积计算含量得：

ATP含量(μmol/mL) =6.875×ΔA测定÷ΔA标准=6.875×0.013÷0.239=0.374 μmol/mL。
相关发表文献：

1. Meixi Peng, Dan Yang,Yixuan Hou, et al. Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis. Cell Death and Disease. March 2019;(IF5.959)

2. Yang Wang, Jianhang Jiao, Shanyong Zhang, et al. RIP3 inhibition protects locomotion function through ameliorating mitochondrial antioxidative capacity after spinal cord injury. Biomedicine & Pharmacotherapy. August 2019;116.(IF3.743)

3. Luo M,Luo Y, Mao N,et al. Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication. Cellular Physiology and Biochemistry. November 2018.

参考文献：

1. Lin X, Wu Y, Chen X, et al. Determination of adenosine phosphate in tobacco leaf by UPLC with phenol-TEA pretreatment [J]. Acta Tabacaria Sinica, 2014, 20(1): 26-31.

2. Beutler E, Mathai C K. A comparison of normal red cell ATP levels as measured by the firefly system and the hexokinase system[J]. Blood, 1967, 30(3): 311-320.

相关系列产品：
BC0060/BC0065   Na⁺k⁺-ATP酶活性检测试剂盒
BC0960/BC0965   Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶活性检测试剂盒

ATP含量测试盒 ATP含量测试盒