葡萄糖含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2500
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
1、试剂一：1μmol/mL葡萄糖溶液；
2、混合试剂的配制：使用前将试剂二和试剂三1:1等体积混合，用多少配多少。
产品说明：
葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物，而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言，葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的能源，而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。
葡萄糖氧化酶（Glucose Oxidase，GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶（Peroxidase，POD）催化过氧化氢氧化4-氨基安替*林偶联酚，生成有色化合物，在505 nm 有特征吸收峰。


技术指标：
低检出限：0.01 μmol/mL
线性范围：0.015-3 μmol/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、超声破碎仪、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 组织的处理：按照组织质量（g）：蒸馏水体积（mL）为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水），研磨成匀浆，置沸水浴中煮沸10 min（盖紧，防止水分散失），冷却至室温后，8000g，25℃离心10min，取上清液备用。

2. 细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：蒸馏水体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 蒸馏水），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3 s，间隔10 s，重复30次），置沸水浴中煮沸10min（盖紧，防止水分散失），冷却至室温后，8000g，25℃离心10min，取上清液备用。
二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。

2. 样本测定（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：

涡旋混匀，置于37℃水浴锅/恒温培养箱反应15min后，于505nm波长处读取吸光度A，分别记为A空白、A标准和A测定。计算ΔA测定=A测定-A空白，ΔA标准=A标准-A空白。（空白管和标准管只需测1-2次）。
三、葡萄糖含量计算

1. 按蛋白浓度计算

葡萄糖含量（µmol/mg prot）= C ×ΔA测定÷ΔA标准×V样÷（Cpr×V样）=ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr

1. 按样本质量计算

葡萄糖含量（µmol/g 质量）= C ×ΔA测定÷ΔA标准×V样÷（W÷V样总×V样）= ΔA测定÷ΔA标准 ÷W

1. 按细菌或细胞数量计算

葡萄糖含量（µmol/10⁶ cell）= C ×ΔA测定÷ΔA标准×V样÷（5÷V样总×V样）= 0.2×ΔA测定÷ΔA标准
C：葡萄糖溶液浓度，1µmol/mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V样：加入的样本体积，100µL=0.1mL；V样总：样本总体积，1mL；W：样本质量，g；5：细菌或细胞数量（以10⁶计），5×10⁶个。
注意事项：
若（A测定-A空白）小于0.005，建议加大提取样本质量（或细胞数量）或者样本上清液的加入量；（A测定-A空白）大于1.5，将上清液用蒸馏水稀释即可。计算公式中注意乘以稀释倍数。
实验实例：

1. 
   

1. 
   

2. 取0.1g小鼠肝脏加入1mL蒸馏水进行前处理步骤，离心取上清；再用蒸馏水稀释2倍后按测定步骤测定，用玻璃比色皿得吸光值ΔA测定=A测定-A空白=0.758-0.006=0.752，ΔA标准=A标准-A空白=0.600-0.006=0.594。按样本质量计算

3. 
   

葡萄糖含量（μmol/g 质量）= ΔA测定÷ΔA标准÷W×2（稀释倍数）=0.752÷0.594÷0.1×2= 25.320 μmol/ g 质量

1. 
   

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2. 取0.1g绿萝叶片加入1mL蒸馏水进行前处理步骤，离心取上清后按测定步骤测定，用玻璃比色皿测得吸光值ΔA测定=A测定-A空白=0.539-0.006=0.533，ΔA标准=A标准-A空白=0.600-0.006=0.594。按样本质量计算

3. 
   

葡萄糖含量（μmol/g 质量）= ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.533÷0.594÷0.1=8.972 μmol/ g 质量

1. 
   

1. 
   

2. 取5百万Jurkat细胞样本加入1mL蒸馏水进行前处理步骤，离心取上清后按测定步骤测定，用玻璃比色皿测得吸光值ΔA测定=A测定-A空白=0.018-0.006=0.012，ΔA标准=A标准-A空白=0.600-0.006=0.594。按细胞数量计算

3. 
   

葡萄糖含量（μmol/10⁶ cell)  = 0.2×ΔA测定÷ΔA标准=0.2×0.012÷0.594=4.040×10^-3 μmol/10⁶ cell
相关发表文献：
[1] Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou,et al. Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion. Cell Death and Disease. March 2019; (IF5.959)
[2] Jing Li,Yabing Duan,Chuanhong Bian,et al. Effects of validamycin in controlling Fusarium head blight caused by Fusarium graminearum: Inhibition of DON biosynthesis and induction of host resistance. Pesticide Biochemistry and Physiology. January 2019; 153:152-160. (IF2.87)
参考文献：
[1] Basagni U, Bonicolini F. Ready to use liquid reagent for determining the glucose content in blood: U.S. Patent 5,077,199[P]. 1991-12-31.
[2] Kabasakalian P, Kalliney S, Westcott A. Enzymatic blood glucose determination by colorimetry of N, N-diethylaniline-4-aminoantipyrine[J]. Clinical chemistry, 1974, 20(5): 606-607.
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