果糖激酶（FRK）活性检测试剂盒说明书

微量法

货号：BC5925

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 提取液：临用前将粉剂一溶于提取液中；该试剂为悬浊液，使用前摇匀即可，2-8℃保存12周；

1. 试剂一：试剂放于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入2.667mL蒸馏水，充分溶解。溶解后的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；

2. 试剂二：试剂放于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入3.03mL蒸馏水，充分溶解。溶解后的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；

3. 试剂三：试剂放于试剂瓶内玻璃瓶中，临用前加入6mL蒸馏水溶解，溶解后的试剂2-8℃分装保存4周；

4. 试剂五工作液：临用前根据样本数量按照试剂五：蒸馏水=8μL:1000μL（共1008μL，约100T）的比例配制，充分混匀，现配现用；为了延长使用时间，此产品多给1支。

5. 试剂六：临用前取一支试剂六加入1mL蒸馏水，充分溶解。溶解后的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融。（该试剂为冻干试剂，可能存在不同瓶间肉眼观察试剂量相差较大甚至量很少的现象，此现象不影响使用，实际质量相同）

产品说明：

果糖激酶（Fructokinase，FRK，EC 2.7.1.4）是催化果糖磷酸化的主要酶。果糖激酶可以作为植物的己糖感受器和信号分子，通过影响植物的生长周期来调控植物的代谢和生长发育进程，果糖磷酸化对于维持淀粉生物合成方向具有重要意义。

FRK催化果糖合成6-磷酸果糖，6-磷酸果糖在磷酸己糖异构酶的作用下异构为6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADH，NADH在340nm有特征吸收峰。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、分析天平、水浴锅/恒温培养箱、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。

操作步骤：具体的操作步骤请见“产品资料”文件

注意事项：

1. 如果∆A小于0.005，可以增加样本量或延长反应时间再进行测定；如果∆A测定大于0.6或A1测定小于A1空白，建议将样本稀释或者缩短反应时间再进行测定。注意同步修改计算公式。

实验实例：

1. 取0.1023g土豆组织样本，加入提取液进行冰浴匀浆，离心后取上清，按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算：ΔA测定=A2测定-A1测定=0.137-0.080=0.057，ΔA空白=A2空白-A1空白=0.001-0.001=0，ΔA=ΔA测定- ΔA空白=0.057。按样本质量计算得：

FRK活性（U/g 质量）=321.54×ΔA÷W = 179.157U/g 质量。

2. 取0.06g酵母粉，加入提取液进行冰浴匀浆，离心后取上清，按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算：ΔA测定=A2测定-A1测定=0.705-0.202=0.503，ΔA空白=A2空白-A1空白=0.001-0.001=0，ΔA=ΔA测定- ΔA空白=0.503。按样本质量计算得：

FRK活性（U/g 质量）=321.54×ΔA÷W =2695.58U/g 质量。

参考文献：

[1] Giroix M H, Jijakli H, Courtois P, et al.Fructokinase activity in rat liver, ileum, parotid gland, pancreas, pancreatic islet, B and non-B islet cell homogenates.[J].International Journal of Molecular Medicine, 2006, 17(3):517-522.

[2] Kurt, Bergbauer, Ralf, et al. Studies on Fructose Metabolism in Cultured Astroglial Cells and Control Hepatocytes: Lack of Fructokinase Activity and Imrrunoreactivity in Astrocytes[J].Developmental Neuroscience, 2009, 18(5-6):371-379.

[3] Schaffer A A, Petreikov M. Inhibition of fructokinase and sucrose synthase by cytosolic levels of fructose in young tomato fruit undergoing transient starch synthesis[J].Physiologia Plantarum, 2010, 101(4):800-806.

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