二胺氧化酶测试盒 微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC1285

规格：100T/48S

产品内容：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 0.25mL×1 支，4℃保存。

试剂二：液体 2mL×1 管，4℃保存。

试剂三：液体 1mL×1 管，4℃保存。

产品说明：

    DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物（肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等）、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛，其活性与核酸和蛋白合成密切相关，能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。

    DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻

联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺，在460nm处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加速率，计算DAO活性。

自备实验用品及仪器：

    天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

二、测定操作表：

1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长460nm，蒸馏水调零。

2、操作表

三、酶活性计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

（1）按样本蛋白浓度计算：

     酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmol H₂O₂所需的酶量为一个酶活力单位（U）。

    DAO 活性（nmol/min/mg prot）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 18×A 460 ÷Cpr

（2）按样本质量计算：

    酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每克组织每分钟催化产生1nmol H₂O₂所需的酶量定义为一个酶活力单位。

     DAO 活性（nmol/min/g）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T= 18×A 460 ÷W

（3）按细胞数量计算：

     酶活性定义： 在pH7.2，温度为37℃条件下，每10⁴个细胞每分钟催化产生1nmol H²O²所需的酶量定义为一个酶活力单位。

DAO 活性（nmol/min/10⁴cell）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量）÷T= 18×A₄₆₀ ÷细胞数量

 (4) 按液体体积计算

     酶活性定义： 在pH7.2，温度为37℃条件下，每毫升血清每分钟催化产生1nmol H₂O₂所需的酶量定义为一个酶活力单位。

    DAO 活性（nmol/min/mL）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反总÷V 样÷T= 18×A₄₆₀

    ε：氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数：7.5 L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：

    样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

（1）按样本蛋白浓度计算：

    酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmol H₂O₂所需的酶量为一个酶活力单位（U）。

    DAO 活性（nmol/min/mg prot）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 36×A 460 ÷Cpr

（2）按样本质量计算：

     酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每克组织每分钟催化产生1nmol H₂O₂所需的酶量定义为一个酶活力单位。

    DAO 活性（nmol/min/g）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T= 36×A₄₆₀÷W

（3）按细胞数量计算：

      酶活性定义： 在pH7.2，温度为37℃条件下，每10⁴个细胞每分钟催化产生1nmol H₂O₂所需的酶量定义为一个酶活力单位。

DAO 活性（nmol/min/10⁴cell）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量）÷T   = 36×A₄₆₀÷细胞数量

(4) 按液体体积计算

     酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每毫升血清每分钟催化产生1nmol H₂O₂所需的酶量定义为一个酶活力单位。

    DAO 活性（nmol/min/mL）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反总÷V 样÷T= 36×A₄₆₀

    ε ：氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数：7.5 L /mmol/cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 反总：

    反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min

注意事项：

 1、如果OD值小于0.01，适当加大提取用样本量；OD值大于0.8，粗酶液可适当稀释，或者减少提取用样本量。

    2、样品蛋白质含量需要另外测定。

二胺氧化酶测试盒订购说明：

1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。 
2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。 
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日新价格为准。 
4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后，将底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。

运输说明：

极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝的箱子，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货，准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。