结合态淀粉合成酶活性检测试剂盒 微量法

注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC3295

规格：100T/96S

产品内容：

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：30mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；

试剂四：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前加入5mL试剂一充分混匀备用；

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一充分混匀备用；

试剂六：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入500μL双蒸水，充分溶解备用；

试剂七：液体250μL×2支，-20℃保存；

试剂八：液体12.5μL×2支；每支临用前加入溶解好的4mL试剂四。

反应液Ⅰ的配制：临用前在试剂二中加入14mL试剂一，缓慢加热，逐渐升温使其溶解，冷却后将其加入试剂三混合溶解。这样可以分两批配制并且测定。

产品说明：

   GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链淀粉的合成。

   GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP⁺还原为NADPH，其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比，通过340nm下测定NADPH的增加量，可以计算GBSS活性。

需自备的的仪器和用品：

   紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液制备

   称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混匀，置冰上待测。

二、测定步骤

   1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长340nm，蒸馏水调零。

   2、在EP管中按顺序加入下列试剂

混匀后立即转移200μL微量石英比色皿或96孔板中， 340 nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。

注意：试剂二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。

三、GBSS活性计算

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

1、按样本蛋白浓度计算：

   单位的定义：每mg组织蛋白在1mL反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

   GBSS活性（U/mg prot）= [ΔA÷（ε×d）×V测]÷(Cpr×V样÷V反总×V上清) ÷T=432×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义：每g组织在1mL反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GBSS活性（U/g 鲜重）=[ΔA÷（ε×d）×V测×10⁹]÷(W÷V提取×V样÷V反总×V上清) ÷T= 432×ΔA÷W 。

V测：测量体积，0.26m L；V样：加入样本体积，0.1m L；V反总：反应体积，0.31mL；V上清：加入上清液体积，0.15mL；V提取：加入提取液体积，1×10^-3 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10^-3mL/nmoL/cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。

b.使用96孔板测定的计算公式如下：

1、按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GBSS活性（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V测]÷(Cpr×V样÷V反总×V上清) ÷T =720×ΔA÷Cpr。

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GBSS活性（U/g 鲜重）=[ΔA÷（ε×d）×V测]÷(W÷V提取×V样÷V反总×V上清) ÷T=720×ΔA÷W。

V测：测量体积，0.26m L；V样：加入样本体积，0.1m L；V反总：反应体积，0.31mL；V上清：加入上清液体积，0.15mL；V提取：加入提取液体积，1×10^-3 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10^-3mL/nmoL/cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。

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1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。
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运输说明：

极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝的箱子，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货，准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。