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试剂的组成和配制:
酸性提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;碱性提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体10 mL×1瓶,4℃保存;试剂二:液体3 mL×1瓶,4℃保存;试剂三:粉剂×1瓶,-20 ℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀,用不完的试剂4℃保存一周;试剂四:粉剂×1瓶,4 ℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀,用不完的试剂4℃保存一周;试剂五:液体3.6mL×1瓶,4 ℃保存;试剂六:液体30mL×1瓶,4 ℃保存;试剂七:液体50mL×1瓶,4 ℃保存。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
商品介绍:
测定原理强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物;紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。该方法测定范围为1~10mg蛋白质,适用于蛋白质浓度高的样品,尤其是动物材料。试剂组成和配置1、双缩脲试剂×1瓶,4℃保存; 2、10mg/ml标准蛋白×1支,-20℃保存; 3、标准蛋白配制:取10mg/ml标准蛋白100μl加双蒸水100μl,即得5mg/ml标准蛋白溶液。 |
商品属性:
产品名称 | |
检测方法 | 可见分光光度法 |
产品规格 | 50管/48样 |
产品货号 | AS6321369 |
NAD+和NADH的提取:
1、血清(浆)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(浆)体积(ml):酸性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建 议取约0.1ml血清(浆),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失); 冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl碱性提取液使之中 和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 NADH的提取:按照血清(浆)体积(ml):碱性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建 议取约0.1ml血清(浆),加入1ml碱性提取液),95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失); 冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 | 2、组织中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:按照组织质量(g):酸性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议取约0.1g 组织,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴 中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 NADH的提取:按照组织质量(g):碱性提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议取约0.1g 组织,加入1ml碱性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴 中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 | 3、细胞或细菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):酸性 提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml酸性提取液), 超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),95℃水浴5min (盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加 入500μl碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 NADH的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):碱 性提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml碱性提取液), 超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),95℃水浴5min (盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。 |
ADH测定操作:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴中保温30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、800μL试剂二和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 测定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A3和A4。△A测定管=A3-A4。
注意:空白管只需测定一次。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
冬菇属周期蛋白依赖性激样3抗体Human PP(Pepsin) ELISA Kit人肽基脯酰顺反异构(PPI)免疫试剂盒
烟草节杆菌杀菌肽/天蚕抗菌肽单克抗体Human Pro-MMP-10(Pro-Matrix Metalloproteinase 10) ELISA Kit人胎球蛋白A(Fetuin A)免疫试剂盒
灰色链霉菌灰色亚种第十七号染色体开放阅读框87抗体Human PPAR-γ(Peroxisome ProlifeRator Activated Receptor Gamma) ELISA Kit人胎盘生长因子(PLGF)免疫试剂盒
洋葱伯克霍尔德菌降钙受体抗体Human PP13(Placental Protein13) ELISA Kit人胎盘碱性磷(PLAP)免疫试剂盒
胶孢补体C2a链多肽抗体Human PPAR-α(Peroxisome ProlifeRator Activated Receptor Alpha) ELISA Kit人胎盘蛋白13(PP13)免疫试剂盒
沙门氏菌马凝集试验抗原CD80抗体Human RIPK2(Receptor TNFRSF Interacting Serine Threonine Kinase 2) ELISA Kit人胎盘催乳(HPL)免疫试剂盒
枯草芽孢杆菌CD19抗体Human PPOX(Protoporphyrinogen Oxidase) ELISA Kit人胎儿血红蛋白(HBF)免疫试剂盒
苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种C-C元件趋化因子26抗体Human PTP1B(protein tyrosine phosphatase 1B) ELISA Kit人胎儿纤连蛋白(fFN)免疫试剂盒
产克雷伯氏菌5号染色体开放阅读框22抗体Human RLN2(Relaxin-2) ELISA Kit人锁链(DES)免疫试剂盒
果生链核盘菌钙激活离子通道4蛋白抗体Human PTPRJ(Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type J) ELISA Kit人羧甲基赖(CML)免疫试剂盒
香栓菌嗜粒趋化蛋白3抗体Human PTPN14(protein tyrosine phosphatase, non-receptor type 14) ELISA Kit人羧化基质谷蛋白(ucMGP)免疫试剂盒
栗疫菌嗜粒趋化蛋白3抗体Human PTPRN(Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type N) ELISA Kit人羧化不全骨钙(ucOC)免疫试剂盒
鸭疫里氏杆菌趋化抗体Human PYGL(Glycogen Phosphorylase, Liver) ELISA Kit人髓样分化因子88(MyD88)免疫试剂盒
空泡单胞菌5号染色体开放阅读框55抗体Human PYGM(Glycogen Phosphorylase, Muscle) ELISA Kit人髓性核分化抗原(MNDA)免疫试剂盒
粪生黑蛋巢表面趋化因子受体7抗体Human Pro-MMP-13(Pro-Matrix Metalloproteinase 13) ELISA Kit人髓系触发受体-1(TREM-1)免疫试剂盒
普茅斯沙雷氏菌色c氧化7A2抗体Human Rac-GAP1(Rac-GTPase Activating Protein 1) ELISA Kit人髓鞘相关糖蛋白抗体(MAG Ab)免疫试剂盒
詹氏生丝单胞菌Hyphomonas│jannaschiana 质量规格:>98%,BRCD68分子试剂盒N,N’-二基蝙蝠葛碱化物
苏云金芽胞杆菌Bacillus│thuringiensis 质量规格:BCCD63分子试剂盒1,7-二羟基-3,4-二氧基山-7
褐囊蜜环菌Armillaria│bruneocystidia H.C. Wang,G.F. Qin & J. Zhao 质量规格:>99%,BRCD5分子样蛋白试剂盒β,β’-二基烯酰阿宁
双缩脲法蛋白含量测试盒50管/48样粉粒红湿伞 D-肉碱3,4二羟基Elisa
*蛹虫草(北冬虫夏草、北虫草) 邻苯二-Ο,Ο′-二乙酸谷氧还蛋白Elisa
顶孢头孢霉 2--5-(三氟甲基)苯磺酰甘胆酸Elisa
皱纹单胞 亚硝酸叔丁酯I型胶原蛋白Elisa
北土地杆 4--3-硝基吡啶盐酸盐II型胶原蛋白Elisa
枯草芽孢杆 1,2-乙二硫S100A12钙结合蛋白Elisa
隔离土地杆 3-羟基丁酸乙酯胆囊收缩Elisa
炭疽芽胞杆 2-溴噻唑-5-甲酸血管紧张IIElisa
细链格孢 2,6-二甲基苄肾Elisa
巴奈特酵母 5-硝基吲唑多药耐药相关蛋白2Elisa
烟管 3-乙基-5-(2-)-4-甲基噻唑溴化物胞壁酰二肽3Elisa
布氏白僵(卵孢白僵) 6-核苷微管相关蛋白7Elisa
枯草芽胞杆 乙酰酸乙酯环氧化2Elisa
酿酒酵母 2-氨基噻唑-4-甲酸乙酯c-Kit蛋白Elisa
大肠杆 2-氨基-5-氟β1 肾上腺受体抗体Elisa