Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷
￥368
qPCR SYBR Green Mix(实时荧光定量)
面议
实时荧光定量qPCR预混液(SYBR Green Mix)
面议
Hieff qPCR SYBR Green Mix(qPCR预混液)
面议
萤火虫荧光素酶报告基因检测试
面议
脱氧核糖核酸酶I，来源于牛胰腺
面议
Agarose琼脂糖
￥158
多片段一步法快速克隆试剂盒
￥410
qPCR SYBR Green Master Mix(实时荧光定量)
面议
Hieff Clone Plus 一步法快速克隆试剂盒
面议
牛胰腺脱氧核糖核酸酶I
面议
慢病毒浓缩试剂盒
面议产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 | 10153ES10 | 10 U | 115.00 |
10153ES60 | 100 U | 695.00 | |
10153ES76 | 500 U | 2,585.00 | |
10153ES80 | 1000 U | 4,785.00 |
产品描述
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。酶溶液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体，可简便地进行高特异性的Hot Start PCR，极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增目的片段的长度可长达13 kb。本产品配备了优化缓冲液，使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品规格 | |||
10153ES10 （10 U） | 10153ES60 （100 U） | 10153ES76 （500 U） | 10153ES80 （1000 U） | ||
10153-A | Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) | 10 μL | 100 μL | 500 μL | 500 μL×2 |
10153-B | 2×Canace® Plus PCR buffer（含Mg2+，dNTPs） | 300 μL | 3×1 mL | 15×1 mL | 30×1 mL |
10153-C | 6×DNA Loading Buffer | 120 μL | 1.2 mL | 6 ml | 12 ml |
产品应用
基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
活性定义
用活性化的大马哈鱼DNA为模板/引物，74°C，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1 U。
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存。有效期1年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
推荐PCR反应体系
组分 | 体积 | 终浓度 |
ddH2O | to 50 μL | - |
2×Canace® Plus PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) | 25 μL | 1× |
DNA模板 | 适量 | - |
2 μL | 0.4 μM | |
Primer反向 (10 μM) | 2 μL | 0.4 μM |
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) | 1 μL | 1 U/50 μL |
【注】：
1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀。
2）Mg2+终浓度：体系终浓度为2mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。
3）高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。
4）不同模板的推荐使用量（25 μL反应体系）：
模板种类 | 扩增片段1 kb-10 kb |
基因组DNA | 50 ng-200 ng |
质粒或病毒DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-2.5 μL（不超过PCR反应总体积的1/10） |
两步法程序（优先推荐）： 三步法程序（常规程序）：
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | |
预变性 | 98°C | 3 min | 1 | 预变性a | 98°C | 3 min | 1 | |
变性 | 98°C | 10 sec | 30-35 | 变性 | 98°C | 10 sec | 30-35 | |
延伸 | 68°C | 30 sec/kb | 退火b | 60°C | 20 sec | |||
终延伸 | 72°C | 5 min | 1 | 延伸c | 72°C | 30 sec/kb | ||
终延伸 | 72°C | 5 min | 1 |
梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）: *不同扩增程序下的特点：
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 程序类型 | 两步法 | 三步法 | 梯度退火 | |
预变性 | 98°C | 3 min | 1 | 速度 | 最快 | 中等 | 慢 | |
变性 | 98°C | 10 sec | 15，每个循环降低1℃ | 特异性 | 高 | 中等 | 高 | |
梯度退火 | 70-55°C | 20 sec | PCR产量 | 中等 | 最高 | 中等 | ||
延伸 | 72°C | 30 sec/kb | 检出率 | 高 | 中等 | 高 | ||
变性 | 98°C | 10 sec | 20 | |||||
正常退火 | 55°C | 20 sec | ||||||
延伸 | 72°C | 30 sec/kb | ||||||
终延伸 | 72°C | 5 min | 1 | |||||
【注】：
a. 预变性温度和时间：推荐温度：98°C，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。
b. 退火温度和时间：推荐温度：60°C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
c. 延伸温度和时间：推荐温度：72°C。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
相关产品
产品名称 | 货号 | 规格 |
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye) 高保真酶预混液 | 10154ES03/08 | 1 mL/5×1 mL |
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 | 10148ES60/76/80 | 100 U/500 U/1000 U |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶预混液HOT | 10149ES03/08 | 1 mL/5×1 mL |
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒HOT | 10909ES20 | 20 T |
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Simple Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒（不含MCS多克隆酶切位点） | 10910ES20 | 20 T |
Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit 一步法快速克隆试剂盒HOT | 10911ES20 | 20 T |
Hieff Clone® Plus Multi One Step Cloning Kit 多片段一步法快速克隆试剂盒HOT | 10912ES10 | 10 T |
Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit 定点突变试剂盒HOT | 11003ES10 | 10 T |
Hieff MutTM Multi Site-Directed Mutagenesis Kit 多点突变试剂盒HOT | 11004ES10 | 10 T |
HB220407
