Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷
¥368qPCR SYBR Green Mix(实时荧光定量)
面议实时荧光定量qPCR预混液(SYBR Green Mix)
面议Hieff qPCR SYBR Green Mix(qPCR预混液)
面议萤火虫荧光素酶报告基因检测试
面议脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺
面议TRIeasy总RNA提取试剂
面议Agarose琼脂糖
¥158多片段一步法快速克隆试剂盒
¥410qPCR SYBR Green Master Mix(实时荧光定量)
面议Hieff Clone Plus 一步法快速克隆试剂盒
面议牛胰腺脱氧核糖核酸酶I
面议产品简介
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)是即用型2×预混合溶液,包含Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase,dNTPs以及优化的缓冲体系。预混液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体,可简便地进行高特异性的Hot Start PCR。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力,扩增目的片段的长度可长达13 kb,该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍,是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。适用于复杂模板的扩增,扩增产物为平末端。
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,反应体系只需加入引物和模板即可,并可以通过两步法的程序进行扩增,简化了实验步骤,节省了时间。本产品中含有电泳指示染料,PCR产物可直接进行电泳。另外,该产品还含有特异保护剂,使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。
产品信息
货号 | 10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08/10154ES60 |
规格 | 100 μL / 1 mL / 5×1 mL/100×1 mL |
储存条件
-25~-15℃保存,有效期1年。
使用说明
推荐PCR反应体系
组分 | 体积(μL) | 终浓度 |
RNase-free ddH2O | to 50 μL | - |
DNA模板*** | 适量 | - |
Forward Primer (10 μM)** | 2 μL | 0.4 μM |
Reverse Primer (10 μM)** | 2 μL | 0.4 μM |
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)* | 25 μL | 1× |
*在终浓度1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶、2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。
** PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM,推荐0.4 μM。
***不同模板的推荐使用量(25 μL反应体系):
模板种类 | 扩增片段1 kb-10 kb |
基因组DNA | 50 ng-200 ng |
质粒或病毒DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-2.5 μL(不超过PCR反应总体积的1/10) |
推荐PCR扩增程序
两步法程序(优先推荐)
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 3 min | 1 |
变性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
延伸 | 68℃ | 30 sec/kb | |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
2)三步法程序(常规程序)
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性* | 98℃ | 3 min | 1 |
变性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
退火** | 60℃ | 20 sec | |
延伸*** | 72℃ | 30 sec/kb | |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
*预变性温度和时间:推荐温度:98°C,时间:3 min,高GC含量模板5-10 min。
**退火温度和时间:推荐温度:60°C,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
***延伸温度和时间:推荐温度:72°C。时间:30 sec/kb,复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
3)梯度温度退火程序(难扩增基因推荐程序)
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 3 min | 1 |
变性 | 98℃ | 10 sec | 15,每个循环降低1℃ |
梯度退火 | 70-55℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
变性 | 98℃ | 10 sec | 20 |
正常退火 | 55℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
4)不同扩增程序下的特点
程序类型 | 两步法 | 三步法 | 梯度退火 |
速度 | 最快 | 中等 | 慢 |
特异性 | 高 | 中等 | 高 |
PCR产量 | 中等 | 最高 | 中等 |
检出率 | 高 | 中等 | 高 |
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。