PCR高保真酶预混液(含染料) PCR Master Mix

10154ESPCR高保真酶预混液(含染料) PCR Master Mix

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2024-09-04 17:02:22
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品简介

PCR高保真酶预混液(含染料) PCR Master Mix是即用型2×预混合溶液,包含Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase,dNTPs以及优化的缓冲体系。预混液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体,可简便地进行高特异性的Hot Start PCR。预混液中添加了延伸因子使得

详细介绍

产品简介


2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)是即用型2×预混合溶液,包含Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase,dNTPs以及优化的缓冲体系。预混液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体,可简便地进行高特异性的Hot Start PCR。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力,扩增目的片段的长度可长达13 kb,该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍,是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。适用于复杂模板的扩增,扩增产物为平末端。

2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,反应体系只需加入引物和模板即可,并可以通过两步法的程序进行扩增,简化了实验步骤,节省了时间。本产品中含有电泳指示染料,PCR产物可直接进行电泳。另外,该产品还含有特异保护剂,使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。


产品信息


货号

10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08/10154ES60

规格

100 μL / 1 mL / 5×1 mL/100×1 mL


储存条件


-25~-15℃保存,有效期1年。


使用说明


  1. 推荐PCR反应体系

组分

体积(μL)

终浓度

RNase-free ddH2O

to 50 μL

-

DNA模板***

适量

-

Forward Primer (10 μM)**

2 μL

0.4 μM

Reverse Primer (10 μM)**

2 μL

0.4 μM

2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)*

25 μL

*在终浓度1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶、2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。

** PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM,推荐0.4 μM。

***不同模板的推荐使用量(25 μL反应体系):

模板种类

扩增片段1 kb-10 kb

基因组DNA

50 ng-200 ng

质粒或病毒DNA

10 pg-20 ng

cDNA

1-2.5 μL不超过PCR反应总体积的1/10

  1. 推荐PCR扩增程序

  1. 两步法程序(优先推荐)

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

98℃

3 min

1

变性

98℃

10 sec

30-35

延伸

68℃

30 sec/kb

终延伸

72℃

5 min

1

2)三步法程序(常规程序)

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性*

98℃

3 min

1

变性

98℃

10 sec

30-35

退火**

60℃

20 sec

延伸***

72℃

30 sec/kb

终延伸

72℃

5 min

1

*预变性温度和时间:推荐温度:98°C,时间:3 min,高GC含量模板5-10 min。

**退火温度和时间:推荐温度:60°C,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

***延伸温度和时间:推荐温度:72°C。时间:30 sec/kb,复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。

3)梯度温度退火程序(难扩增基因推荐程序)

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

98℃

3 min

1

变性

98℃

10 sec

15,每个循环降低1℃

梯度退火

70-55℃

20 sec

延伸

72℃

30 sec/kb

变性

98℃

10 sec

20

正常退火

55℃

20 sec

延伸

72℃

30 sec/kb

终延伸

72℃

5 min

1

4)不同扩增程序下的特点

程序类型

两步法

三步法

梯度退火

速度

最快

中等

特异性

中等

PCR产量

中等

最高

中等

检出率

中等


注意事项


1. 本产品仅作科研用途

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。



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