Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
产品简介
FuniCut™系列内切酶是通过基因工程重组技术，可在5~15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶，适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA等。FuniCut™系列快速内切酶共用一种酶切缓冲液，从而简化了酶切反应体系，另外，有良好的酶活冗余度，可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。
产品信息
货号 | 15057ES60 |
规格 | 100 T |
识别位置 | 5'-GGCCNNNN↓NGGCC-3' 3'-CCGGN↑NNNNCCGG-5' |
推荐反应条件 | 1×FuniCut™ 缓冲液；50°C孵育 |
酶活 | 20 U/μL |
失活条件 | 不可热失活，请使用酚氯仿抽提或柱纯化。 |
组分信息
组分编号 | 组分名称 | 15057ES60 |
15057-A | FuniCut™ SfiI | 100 μL |
15057-B | 10×FuniCut™ Buffer | 1 mL |
15057-C | 10×FuniCut™ Color Buffer* | 1 mL |
*10×FuniCut™ Color Buffer包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。FuniCut™ Color Buffer的红色染料与2500 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
储存条件
-25~-15℃保存，有效期2年。
注意事项
1. 3 h孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性。
2. 受CpG甲基化影响，剪切可能受阻。
3. 受Dcm甲基化影响，剪切可能受阻。
4. 本产品仅作科研用途。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1) 按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）
组分 | 质粒DNA | PCR产物 | 基因组DNA |
ddH2O | 15 μL | 16 μL | 30 μL |
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer | 2 μL | 3 μL* | 5 μL |
底物DNA | 2 μL (~1 μg) | 10 μL (~0.2 μg) | 10 μL (5 μg) |
FuniCut™ SfiI | 1 μL | 1 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 30 μL | 50 μL |
*本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×FuniCutTM Buffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验，酶切前需纯化PCR产物。
2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
3) 50°C孵育15 min（质粒），或15~30 min（PCR产物），或30~60 min（基因组DNA）。
4) 酚氯仿抽提或柱纯化（可选）。
5) 如果使用FuniCut™ Color Buffer进行酶切反应，得到的产物可直接上样电泳。
2. 双酶切或多酶切
1) 每种内切酶的用量为1 μL，并根据需要适当扩大反应体系。
2) 所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。
3) 如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，以较高的温度进行孵育。
3. 质粒的扩大反应体系
组分 | 体积（20 μL） | 体积（20 μL） | 体积（50 μL）* |
DNA | 1 μg | 2 μg | 5 μg |
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer | 2 μL | 2 μL | 5 μL |
FuniCut™ SfiI | 1 μL | 2 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 20 μL | 50 μL |
*如果总反应体系大于20 μL，可使用水浴、金属浴或沙浴，并增加孵育时间。
4. 不同DNA中的识别位点数
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 0 | 2 |
5. 甲基化修饰影响
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
无影响 | 剪切受影响 | 剪切受影响 | 无影响 | 无影响 |
6. 不同反应缓冲液中的活性*
反应缓冲液 | FuniCut™ Buffer | Thermo Scientific FastDigest Buffer | NEB CutSmart® Buffer | Takara QuickCut™ Buffer |
活性 | 100% | 100% | 100% | 100% |
*活性数据来自翌圣生物限制酶标准反应体系下的检测。
Ver.CN20230703
