Yeasen/翌圣生物 品牌
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IL-1又称为淋巴细胞刺激因子，细胞来源主要由活化的单核-巨噬细胞产生，主要存在形式为IL-1α和IL-1β，在体内发挥免疫调节作用。IL-1α作为IL-1家族主要成员，还可在上皮细胞、内皮细胞和基质细胞中表达，参与各种免疫反应、炎症过程和造血。可通过多种刺激在造血细胞和非造血细胞中上调。在非造血细胞中，IL-1α以TAK1依赖的方式通过髓系细胞上的IL1R发出信号，以诱导促炎细胞因子的表达。IL-1α也在病毒、真菌或原生动物感染后中性粒细胞的募集和宿主防御中发挥作用。IL-1α产生的失调与许多自身炎症性疾病相关，目前白介素1α的治疗潜力被科研人员关注，越来越多的临床试验将它们作为治疗药物和靶点。
翌圣Mouse IL-1α ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定血清、血浆中的小鼠白介素1α(Mouse IL-1α)。特异性抗小鼠白介素1α抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的小鼠白介素1α与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中小鼠白介素1α的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
货号 | 98012ES48 / 98012ES96 |
规格 | 48 T / 96 T |
检测范围 | 15.63-1000 pg/mL |
检测方法 | 双抗夹心法 |
检测物种 | 小鼠 |
检测时长 | 4.5小时 |
灵敏度 | 6.64 pg/mL |
稀释线性 | 84 - 125% |
回收率 | 74 - 111% |
板内差 | 5.3% |
板间差 | 5.9% |
浓度（pg/mL） | 显色值 | 平均值 | 校准值 | |
1000 | 2.719 | 2.785 | 2.752 | 2.752 |
500 | 1.794 | 1.769 | 1.782 | 1.783 |
250 | 1.097 | 1.017 | 1.057 | 1.054 |
125 | 0.611 | 0.570 | 0.590 | 0.592 |
62.5 | 0.342 | 0.309 | 0.325 | 0.328 |
31.25 | 0.197 | 0.180 | 0.189 | 0.188 |
15.63 | 0.125 | 0.113 | 0.119 | 0.115 |
0 | 0.040 | 0.039 | 0.040 | / |
标曲数据
数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。
标准曲线图
灵敏度检测
IL-1α的检测限为6.64 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
精密度检测
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定8次，评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测24次，评估酶标板间的精密度。
项目 | 板内精密度 | 板间精密度 | ||||
样本 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
8 | 8 | 8 | 24 | 24 | 24 | |
平均值 | 457.5 | 107.3 | 28.3 | 463.6 | 105.7 | 29.4 |
标准差 | 28.1 | 4.5 | 1.5 | 32.1 | 4.0 | 2.0 |
变异系数（%） | 6.1 | 4.2 | 5.5 | 6.9 | 3.8 | 6.9 |
回收率检测
通过不同水平的IL-1α添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:
样本类型 | 平均回收率(%) | 范围（%） |
血清 | 94.6 | 78.0-110.9 |
血浆 | 80.9 | 73.7-89.8 |
细胞培养上清 | 95.8 | 78.5-104.8 |
稀释线性检测
血清稀释比例 | 平均期望值(%) | 范围（%） |
1:02 | 98.6 | 91.0-105.7 |
1:04 | 107.2 | 110.3-105.9 |
1:08 | 117.5 | 114.5-121.6 |
1:16 | 103.7 | 98.4-107.4 |
血浆稀释比例 | 平均期望值(%) | 范围（%） |
1:02 | 94.5 | 83.8-103.3 |
1:04 | 109.3 | 98.0-120.1 |
1:08 | 112.2 | 111.5-112.8 |
1:16 | 110.5 | 103.3-124.8 |
细胞培养上清稀释比例 | 平均期望值(%) | 范围（%） |
1:02 | 102.7 | 92.2-114.2 |
1:04 | 111.4 | 103.5-115.8 |
1:08 | 107.5 | 104.6-109.1 |
1:16 | 101.7 | 98.2-106.6 |
样本值
应用本试剂盒，检测若干健康志愿者的样本，志愿者的用药史不详。
样本类型 | 样本数目 | 平均值（pg/mL） | 样本值（pg/mL） |
血清 | 8 | n.d. | n.d. |
血浆 | 8 | n.d. | n.d. |
细胞培养上清 | 4 | n.d. | n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得15.63 pg/mL
测定特异性
本试剂盒识别天然和重组小鼠白介素1α。下述因子进行了特异性的评估，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
Recombinant human: | Recombinant Mouse: | Recombinant Rat: | ||
IFN-γ | IL-6 | IFN-γ | IL-6 | IFN-γ |
IL-1α | IL-10 | IL-1β | IL-10 | IL-1β |
IL-1β | IL-12 | IL-1ra | IL-13 | IL-2 |
IL-1ra | IL-13 | IL-2 | IL-21 | IL-4 |
IL-2 | IL-16 | IL-4 | IL-22 | IL-6 |
IL-4 | IL-17 | IL-5 | IL-10 | |
IL-5 | IL-22 | |||
问题 | 造成原因 | 解决方法 |
标曲不好 | 移液量不准确 | 检查移液器，按时校准，仔细操作，充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
稀释方法不恰当 | ||
显色值偏低 | 孵育时间太短 | 给予足够的孵育时间，样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
移液量不足或稀释不当 | 校准移液器和规范操作 | |
CV偏高 | 酶标板清洗不当 | 使用正确的洗涤工序；如果使用洗板机，检查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 | 准备新鲜洗液 | |
灵敏度较低 | 试剂盒储存不当 | 按照产品组分表进行保存。 |
