Yeasen/翌圣生物 品牌
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白细胞介素-18（IL-18），也称为IL-1F4，是一种属于IL-1超家族的促炎细胞因子，由巨噬细胞和其他细胞产生。成熟的人IL-18与小鼠和大鼠IL-18具有大约63%的氨基酸序列同一性。IL-18的激活是由感染或组织损伤诱导的，并导致慢性炎症的疾病病理学。在IL-12或IL-15存在的情况下，IL-18通过诱导IFN-γ的产生以及CD8+T细胞和NK细胞的溶解活性来增强抗病毒Th1免疫应答。在不存在IL-12或IL-15的情况下，IL-18促进CD4+T细胞和嗜碱性粒细胞产生Th2细胞因子IL-4和IL-13。IL-18还促进髓系树突状细胞成熟并触发中性粒细胞呼吸爆发。在癌症中，IL-18表现出多种活性，包括增强抗肿瘤免疫、抑制或促进血管生成、促进肿瘤细胞转移。
翌圣Mouse IL-18 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定血清、血浆中的小鼠白介素18(Mouse IL-18)。特异性抗小鼠白介素18抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的小鼠白介素18与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中小鼠白介素18的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
货号 | 98011ES48 / 98011ES96 |
规格 | 48 T / 96 T |
检测范围 | 31.25-2000 pg/mL |
检测方法 | 双抗夹心法 |
检测物种 | 小鼠 |
检测时长 | 4.5小时 |
灵敏度 | 17.44 pg/mL |
稀释线性 | 82 - 121% |
回收率 | 93 - 124% |
板内差 | 3.6% |
板间差 | 5.2% |
标曲数据
浓度（pg/mL） | 显色值 | 平均值 | 校准值 | |
2000 | 2.719 | 2.785 | 2.752 | 2.207 |
1000 | 1.794 | 1.769 | 1.782 | 1.296 |
500 | 1.097 | 1.017 | 1.057 | 0.683 |
250 | 0.611 | 0.570 | 0.590 | 0.346 |
125 | 0.342 | 0.309 | 0.325 | 0.183 |
62.5 | 0.197 | 0.180 | 0.189 | 0.108 |
31.25 | 0.125 | 0.113 | 0.119 | 0.074 |
0 | 0.040 | 0.039 | 0.040 | / |
数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。
标准曲线图
灵敏度检测
IL-18的检测限为17.44 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
精密度检测
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定8次，评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测24次，评估酶标板间的精密度。
项目 | 板内精密度 | 板间精密度 | ||||
样本 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
8 | 8 | 8 | 24 | 24 | 24 | |
平均值 | 1287.1 | 282.8 | 98.3 | 1273.2 | 283.6 | 102.4 |
标准差 | 43.8 | 11.1 | 3.4 | 75.4 | 11.7 | 5.6 |
变异系数（%） | 3.4 | 3.9 | 3.5 | 5.9 | 4.1 | 5.5 |
回收率检测
通过不同水平的IL-18添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:
样本类型 | 平均回收率(%) | 范围（%） |
血清 | 117.5 | 100.3-124.3 |
血浆 | 106.1 | 93.3-113.8 |
细胞培养上清 | 111.8 | 100.8-121.6 |
稀释线性检测
血清稀释比例 | 平均期望值(%) | 范围（%） |
1:02 | 97.5 | 91.1-103.9 |
1:04 | 99.9 | 94.9-108.5 |
1:08 | 104.1 | 99.1-108.3 |
1:16 | 99.3 | 93.6-106.3 |
血浆稀释比例 | 平均期望值(%) | 范围（%） |
1:02 | 101.5 | 85.2-112.2 |
1:04 | 94.5 | 89.5-103.7 |
1:08 | 109.6 | 98.4-120.3 |
1:16 | 105.8 | 92.3-116.3 |
细胞培养上清稀释比例 | 平均期望值(%) | 范围（%） |
1:02 | 93.0 | 81.7-102.8 |
1:04 | 97.4 | 93.1-101.5 |
1:08 | 114.0 | 104.5-120.7 |
1:16 | 110.1 | 95.2-120.0 |
样本值
应用本试剂盒，检测若干健康志愿者的样本，志愿者的用药史不详。
样本类型 | 样本数目 | 平均值（pg/mL） | 样本值（pg/mL） |
血清 | 10 | 71.6 | n.d.-142.1 |
血浆 | 8 | 87.1 | n.d.-179.8 |
细胞培养上清 | 4 | n.d. | n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得31.25 pg/mL
测定特异性
本试剂盒识别天然和重组小鼠白介素18。下述因子进行了特异性的评估，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
Recombinant human: | Recombinant Mouse: | |
GM-CSF | IL-6 | IFN-γ |
IFN-γ | IL-10 | IL-1α |
IL-1α | IL-12 | IL-1β |
IL-1β | IL-17A | IL-4 |
IL-2 | IL-18 | IL-6 |
IL-3 | IL-23 | IL-10 |
IL-4 | TNF-α | IL-17A |
IL-5 | TNF-α | |
问题 | 造成原因 | 解决方法 |
标曲不好 | 移液量不准确 | 检查移液器，按时校准，仔细操作，充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
稀释方法不恰当 | ||
显色值偏低 | 孵育时间太短 | 给予足够的孵育时间，样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
移液量不足或稀释不当 | 校准移液器和规范操作 | |
CV偏高 | 酶标板清洗不当 | 使用正确的洗涤工序；如果使用洗板机，检查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 | 准备新鲜洗液 | |
灵敏度较低 | 试剂盒储存不当 | 按照产品组分表进行保存。 |
