Life-iLab/李记生物 品牌
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产品描述
All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)是一款高效、便捷且高质量的单链 cDNA 合成试剂盒,包含热稳定的 M-MLV GIII 逆转录酶及其反应缓冲液、RNA 酶抑制剂、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和随机引物等所有逆转录反应所需组分,仅需添加 RNA 模板和水即可启动反应,生成的 cDNA 主要用于后续的 qPCR 分析。
提取的RNA 样本常存在基因组DNA(gDNA)污染,可能导致gDNA 与 cDNA 在 qPCR 中同时扩增,影响定量准确性。本试剂盒通过 dsDNase 高效去除gDNA,特异性降解双链 DNA或DNA-RNA 杂合链中的 DNA 链,并在逆转录温度下快速不可逆失活。与传统使用的 DNase I对比,无需额外 EDTA 处理,简化实验流程,降低逆转录反应的抑制风险。
本试剂盒可在同一管中进行逆转录和gDNA去除两个反应,操作简便,可有效降低复杂加样过程造成的样品污染和 RNA 降解的风险。但若基因组污染严重程度,建议选择采用去除gDNA 污染与逆转录分开进行的操作方法。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
All-in-One RT MasterMix (with dsDNase) | AN33L718 | 20T |
All-in-One RT MasterMix (with dsDNase) | AN33L719 | 100T |
产品组分
组分 | AN33L718(20T) | AN33L719(100T) |
A. All-in-One RT MasterMix | 80 μL | 400 μL |
B. dsDNase | 20 μL | 2*50 μL |
C. 10× dsDNase Buffer | 40 μL | 200 μL |
D. Nuclease-Free Water | 400 μL | 2*1 mL |
运输与保存
蓝冰运输。-20℃保存,有效期24个月。
使用方法
1. 针对基因组 DNA 含量低的 RNA 样品(推荐方案)
① 于冰上配制如下反应体系:
试剂 | 使用量 |
模板 RNAa | 50 ng~1 μg |
All-in-One RT MasterMix | 4 μl |
dsDNase | 1 μl |
Nuclease-Free Water | To 20 μl |
a . 推荐使用试剂盒提取的高质量 RNA 作为模板。
② 37℃温育 2 min,以去除gDNA 污染;
③ 55℃温育 15 min;
④ 反应结束后,85℃温育 5 min 以终止反应;
⑤ 迅速将获得的 cDNA 置于冰上,用于后续实验;或立即保存于 -20℃。
2. 针对基因组 DNA 含量高的 RNA 样品
(1) 基因组 DNA 污染去除
① 于冰上配制如下反应体系:
试剂 | 使用量 |
模板 RNAa | 50 ng~1 μg |
dsDNase | 1 μl |
10× dsDNase Buffer | 1 μl |
Nuclease-Free Water | To 10 μl |
a. 推荐采用试剂盒提取的 RNA 作为模板。
② 轻柔吸打混匀,瞬离;
③ 37℃温育 2 min,以去除基因组 DNA 污染;
注:若 RNA 中基因组 DNA 污染严重,可适当延长 37℃温育时间至 5 min。
④ 65℃温育 2 min,使 dsDNase 失活, 冰上放置。
(2) 第一链 cDNA 合成
① 于冰上配制如下反应体系:
试剂 | 使用量(实验组) |
“实验 (1)”反应产物 | 10 μl |
All-in-One RT MasterMix | 4 μl |
Nuclease-Free Water | To 20 μl |
② 轻柔吸打混匀,瞬离;
③ 50℃温育 15 min;
注:若目标 RNA 不含 Poly(A) 结构,可预先 25℃温育 10 min。
④ 反应结束后, 85℃温育 5 min,以终止反应;
⑤ 将获得的 cDNA 溶液置于冰上,用于后续实验。
注:cDNA 溶液置于 -20℃储存,建议不超过 1 周;置于 -80℃可长期储存。
注意事项
1. 预混液中已包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物,适用于含有 Poly(A) 结构的真核生物 mRNA,以及不含 Poly(A) 结构的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板,但不适用于 miRNA 等小RNA模板。
2. 由于随机引物会在RNA的任意位置启动逆转录,因此不建议使用本产品进行真核生物全长cDNA的克隆。
3. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。