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上海市所在地
LyGreen HRM专用染料(20×in water)
¥8502 x qPCR Mix(SYBR Green)
¥80Real-time PCR/PCR模版稀释液
¥380单链cDNA合成试剂盒(逆转录)
¥280一站式鼠尾基因快速鉴定试剂盒
¥380All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)
¥280Evagreen (20 × in water)
¥580PikoGreen dsDNA quantitation reagent
¥1650PikoGreen dsDNA定量试剂盒(Broad Range)
¥650Pikogreen dsDNA定量试剂盒(超敏)
¥650产品描述
2 x Taq PCR Master Mix 是PCR 反应预混液,其中包含Taq DNA Polymerase、dNTPs、反应缓冲液、loading Dye 等成分,使用时只需取适量本产品,加入模板和引物,并加入 ddH2O 补足体积,使反应体系浓度为 1× 即可进行 PCR 反应。本产品最长可扩增 5kb DNA片段,具有良好的扩增特异性和模板兼容性, PCR 产物 3' 端带突出 A 碱基,纯化后可直接用于 T/A 克隆。
本产品中包含两种染料,PCR反应完成后无需额外添加 loading buffer,可以直接进行电泳,且电泳过程中会出现两个指示条带。该染料不影响 PCR 扩增效率,但对于需要对 PCR 产物进行吸光度、荧光等光学分析的实验,建议在分析前对 PCR 产物进行纯化,或使用无染料的PCR预混液。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
2 x Taq PCR Master Mix | AN11L818 | 2*1mL |
2 x Taq PCR Master Mix | AN11L819 | 5*1mL |
运输与保存
蓝冰运输。-20℃保存,有效期24个月。
使用方法
1. 常规 PCR 反应体系
组分 | 20 μL体系 | 50 μL体系 | 终浓度 |
2 x Taq PCR Master Mix | 10 μL | 25 μL | 1 x |
正向引物(10 μM)(1) | 0.4-0.8 μL | 1-2 μL | 0.2-0.4 μM |
反向引物(10 μM)(1) | 0.4-0.8 μL | 1-4 μL | 0.2-0.4 μM |
DNA 模板(2) | X μL | X μL | - |
ddH2O | To 20 μL | To 50 μL | - |
(1) 引物推荐终浓度为 0.2~0.4 μM,效果不佳时可以在 0.1~1 μM 浓度范围内进行调整;
(2) 不同模板最佳反应浓度有所不同,以 50 μL 体系为例:模板为基因组 DNA 时,一般推荐的使用量为 10~400 ng;当模板为质粒或病毒 DNA 时,一般推荐的使用量为 10 pg~20 ng。
2. 常规 PCR 反应程序
步骤 | 温度 | 时间 |
预变性(1) | 94℃ | 3~5 min |
变性 | 94℃ | 15 sec |
退火 | 53~65℃ | 15 sec |
延伸(2) | 72℃ | 30~60 sec/kb |
30~35 Cycles | ||
终延伸 | 72℃ | 5min |
(1) 该预变性条件适合绝大多数扩增反应, 对于一些复杂模板, 例如:菌液、菌落(尤 其是酵母)的PCR 扩增,预变性时间可适当延长至 10 min,以提高预变性效果;
(2) 关于延伸速率,当目的片段长度不超过 2 kb 时,推荐使用 30 sec/ kb;当目的片段长度大于 2 kb 时,推荐使用 60 sec/kb。延伸速率与模板复杂程度有关,如遇产率较低可适当提高延伸时间。
注:如果使用酵母菌液作为PCR 扩增模板,建议目的片段长度不超过2.5kb, 若超出2.5kb, 建议将酵母菌液预先进行破壁处理。
3. 凝胶浓度对应的染料迁移距离
琼脂糖凝胶浓度 | 金色条带 | 蓝色条带 |
0.8% | ~80 bp | 4000 bp |
1.0% | ~40 bp | 2000 bp |
1.5% | ~20 bp | 1500 bp |
2.0% | <10 bp | 1200 bp |
2.5% | <10 bp | 1200 bp |
3.0% | <10 bp | 1200 bp |
注:染料会影响吸光度。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 本产品在短期 -20℃ 储存时不会凝固,可以随取随用,如遇储存温度波动,体系结冰为正常现象不影响使用。
3. 建议将所有的反应组分在冰上配制,最后加入2 x Taq PCR Master Mix。
4. 使用基因组模板进行较长片段扩增需要使用高质量纯化的DNA模板,可以提高 PCR 成功率。
5. 本产品扩增产物可用于 T/A 克隆。由于本产品含有 Loading Dye,PCR 产物需经过切胶回收后才可充分去除 Loading Dye。
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本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。