AN54L029PikoGreen dsDNA quantitation reagent
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PikoGreen dsDNA quantitation reagent是一种极为灵敏的双链DNA荧光染料，仅与DNA双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与DNA浓度呈正比，在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下，可以选择性地检测低至25 pg/mL的dsDNA。与传统DNA定量方法相比，具有灵敏度高，特异性强，耐受性好，线性范围宽及方便操作等优点，适用于cDNA文库构建、DNA亚克隆、PCR产物等领域的DNA浓度的精确测定。相比传统的方法，Pikogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势：
灵敏：数量级较UV吸光读数更敏感，可节省样品。
特异性强：只结合dsDNA，特异性强，不受样品常规污染影响。传统紫外吸光法容易受样品中存在的单链DNA，蛋白，RNA等影响。
耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。
线性范围宽：PikoGreen dsDNA染料测定DNA浓度，在100pg/ml-100ng/ml范围内呈良好线性；荧光计兼容。
容易使用：在样品中加入染料，等待5~6 min染色，然后读数即可，且适用于96和384孔板。与大多数基于荧光的酶标仪和可适用于各种DNA样品分析、PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。
该分析在四个数量级范围内呈线性，且几乎无序列依赖性，可以精确地测量多个来源的DNA，包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物。该方法因其稳定性、灵敏性，已经录入《中国药典》。
订购信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| PikoGreen dsDNA quantitation reagent(优于PicoGreen) | AN54L029 | 1 mL |
运输与保存
蓝冰运输。-20℃避光保存，有效期24个月。
使用方法
1. PikoGreen工作液的配制
使用前将PikoGreen dsDNA定量试剂回温至室温；PikoGreen以100 µL 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO中的（共10管）。实验当天，根据实验需求用1×TE按1:200 的比例稀释适量定量试剂浓缩液。例如要准备足够的操作溶液以2 mL检测体系测定20个样品，可向19.9 mL 1×TE 中加入100 µL PikoGreen dsDNA 定量试剂。工作液见光易降解，尽量在配好后几小时内使用。
2. 配制标准品DNA溶液
（1）用1 X TE溶液溶解dsDNA制备1 μg/mL dsDNA 。根据在1 cm 光程长度的比色杯中A260 nm时的吸光度确定DNA 浓度；相应于1 μg/mLdsDNA 溶液A260=0.02。标准液常用小牛胸腺DNA制备，PikoGreen 试剂测定法在通常污染核酸*剂的几种复合物存在的条件下仍能保持线性良好，但是，为了得到有效的对照处理，被用来做标准曲线的dsDNA 溶液要用和实验样品相同的方式来处理，并且应该包含相同的可能存在的污染物。
（2）制备从0.5 ng/mL 到500ng/mL（见表1）单重复8 个点的标准曲线。配制一系列的标准DNA 溶液，然后与等体积的PikoGreen 工作液混和，放入1 x 1cm 比色杯中。混合相同体积的1 x TE 和PikoGreen 操作溶液作为空白对照,避光于室温下放置2~5 min。
表1: 用1 x 1cm 比色杯时DNA 标准浓度配制参考
| 标准DNA 溶液浓度（ng/mL） | 标准DNA 溶液体积（mL） | PikoGreen 工作液体积（mL） | 标准DNA 终浓度(ng/mL) |
| 1000 | 1 | 1 | 500 |
| 200 | 1 | 1 | 100 |
| 50 | 1 | 1 | 25 |
| 20 | 1 | 1 | 10 |
| 5 | 1 | 1 | 2.5 |
| 2 | 1 | 1 | 1 |
| 1 | 1 | 1 | 0.5 |
| 0 | 1 | 1 | 空白 |
（3） 当用微量检测皿适配器时，PikoGreen 测定也可在较低的测定体积（50 μL 到200 μL）内完成。产生从1 ng/mL 到100 ng/mL（见表2）的标准曲线，配制一系列的标准DNA 溶液，然后与等体积的PikoGreen 工作液混和，将至少50 μL 溶液转移到微量检测皿中。确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿的外部经常可以驱散气泡。避光于室温下放置2-5 min。
表2：用微量检测皿DNA 标准浓配制参考
| 标准DNA 溶液浓度（ng/mL） | 标准DNA 溶液体积（mL） | PikoGreen 工作液体积（mL） | 标准DNA 终浓度(ng/mL) |
| 200 | 30 | 30 | 100 |
| 50 | 30 | 30 | 25 |
| 20 | 30 | 30 | 10 |
| 5 | 30 | 30 | 2.5 |
| 2 | 30 | 30 | 1 |
| 0 | 30 | 30 | 空白 |
（4） 孵育后用合适的荧光计测量样品荧光值。Ex/Em=480 nm/520 nm，为了减少光漂白，应保持所有样品的检测时间一致。用荧光值最大的样品校正仪器。
（5）用检测数据与DNA标准溶液浓度做回归分析，制作标准曲线。
3. 样品分析
（1）用1 x TE 稀释待测DNA 样品至需要的体积（1x1 cm 比色杯需1.0 mL，微量检测皿需25~100 μL）。对样品高度稀释可以确保任何污染物都被最大限度地冲淡。然而，也要避免取样体积太小而无法精确吸取的情况。
（2）在每个样品中加入等体积PikoGreen 工作液，混合好，将混合物移入合适的比色杯，避光于室温下放置2~5 min。
（3）检测、读取荧光值，换算样品中dsDNA浓度。可以对样品进行不同的稀释处理重复测定以确保结果的准确性。
注意事项
本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
PikoGreen定量试剂含有DMSO，PikoGreen 是结合dsDNA，操作时采取适当防护，戴手套小心操作。
尽管常见污染物不会影响PikoGreen 检测dsDNA浓度（见表3），但是当样品中dsDNA浓度太低，RNA, ssDNA浓度超过dsDNA 10倍以上时，RNA, ssDNA等污染还是会对检测结果产生较大干扰，在此种情况下，RNA 酶可以消除RNA干扰, RNA 酶A、酶T1 、核酸酶S1 结合能除去ssDNA干扰，从而保证样品荧光值是由dsDNA 产生。
表3：Pikogreen定量耐受的污染物列表
| 物质名称 | 最大耐受浓度 | 信号变化百分比 |
| Salts | ||
| Ammonium acetate | 50 mM | 3% decrease |
| Sodium acetate | 30 mM | 3% increase |
| Sodium chloride | 200 mM | 30% decrease |
| Zinc chloride | 5 mM | 8% decrease |
| Magnesium chloride | 50 mM | 33% decrease |
| Urea | 2 M | 9% increase |
| Organic Solvents | ||
| Phenol | 0.1% | 13% increase |
| Ethanol | 10% | 12% increase |
| Chloroform | 2% | 14% increase |
| Detergents | ||
| Sodium dodecyl sulfate | 0.01% | 1% decrease |
| Triton X-100 | 0.1% | 7% increase |
| Proteins | ||
| Bovine serum albumin | 2% | 16% decrease |
| IgG | 0.1% | 19% increase |
| Other Compounds | ||
| Polyethylene glycol | 2% | 8% increase |
| Agarose | 0.1% | 4% increase |
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