质粒名称：pHyVec4

质粒规格：2ug

实验步骤:

1)质粒提取

1.10,0001min离心收集1.5-5ml菌液沉淀于1.5ml离心管中

2.加入100溶液1,振荡至*悬浮

3.加入200溶液2,立即轻柔颠側离心管6次,使菌体充分裂解,随后将离心管冰上放置

3分钟

4.加入150山溶液3,立即温和颠倒离心管数次,冰上放置3分钟,10,00g离心10mins

5.将步骤4的上清转移至新的离心管(尽量去除杂质),加入等体积的苯酚/氖仿/异成醇混

合均匀10,000离心5min

将步骤5的上清转移至新的离心管,加入2倍体积的无水乙醇,室温放置5-1omin,沉

降DNA

7.10000g离心10分钟,弃乙醇,保留沉淀,加入1ml706的乙醇洗涤沉淀,10,000离

心5分钟

8.倒掉乙醇溶液,用吸水纸吸净管壁上的水珠,室温蒸发痕量乙醇

9.加入适量含 Rnase的TE或灭菌双蒸水溶解质粒DNA

2)质粒鉴定琼脂糖礙胶电泳

灌胶:胶中加入芡光染料〈 SYBR Green)

加样:质粒+上样緩冲液→混匀

电泳

结果观察:UV灯下

pHyVec4实验分析：

裂解细胞中除含有质粒DNA外,还含有基因组DNA、各种RNA、蛋白质和脂类等物质,因

用碱裂解法除去杂质

1、防止DNA裂解: Solution1

1)、所含糖增加溶洨黏度,維持渗透压,防止DNA受机械剪切作用降解

100389-200301 间苯二酚 含量测定 50mg

100390- 200502 维生素B1 含量测定 100mg

维生素BT 含量测定 100mg

100394-200401 乙水杨胺 含量测定 100mg

100396-200301 枸橼酸 含量测定 200mg

100398-200701 丹蒽醌 含量测定 100mg

100399-200601 氢溴樟柳碱 含量测定 100mg

100401-200501 顺铂 含量测定 100mg

100407-200301 棓丙酯 含量测定 50mg

100408-200401 氯美扎酮 UV法溶出度检查 100mg

100410-200301 磷酸氢钙 UV法含量测定 100mg

100411-200501 磺胺二甲嘧啶 含量测定 100mg

100412-200401 磺胺脒 HPLC法含量测定 100mg

100413-200601 磺胺醋酰胺 鉴别 100mg