ATCC 品牌
经销商厂商性质
上海市所在地
细胞名称 小鼠杂交瘤细胞株;5D5培养
形态特性 淋巴母细胞样
品牌 悬浮生长
特征特性 该细胞属专利保藏,其特征特性尚未公开。
培养条件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
传代方法 1:
3传代,3-4天传1次
传代情况 C5
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 未定
小鼠杂交瘤细胞株;5D5培养操作流程:
1.1 主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线
贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱(或PBS洗1-3次)。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml,按此比例进行消化,(根据经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml*培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后分置其它无菌培养瓶内,加入*培养基后继续培养或实验。
悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入*培养基继续培养,如要高浓度可先离心1000rpm,5min后加入*培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入*培养基继续培养。需要指出的是,在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。
Anti-Phospho-MYPT1 (Ser668) /FITC 荧光素标记磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Anti-TRF1/FITC 荧光素标记端粒结合蛋白1抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ABCF3 三磷酸腺苷结合盒转运蛋白F亚基3抗体 规格 0.2ml
Mouse Anti-Guinea pig IgG/AP 碱性磷酸酶(AP)标记的小鼠抗豚鼠IgG 0.1ml
GLP-2 英文名称: 胰高血糖素样肽-2抗体 0.1ml
Rhesus antibody Rh RAB38 G蛋白结合蛋白RAB38抗体 规格 0.2ml
Anti-TRF1/FITC 荧光素标记端粒结合蛋白1抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
MYO/MB(Mouse Myoglobin) ELISA Kit 小鼠肌红蛋白Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-Cullin 4a/FITC 荧光素标记Cullin 4a蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DCUN1D2 DCN1样蛋白2抗体 规格 0.2ml
Horse IgM/APC 荧光素APC标记马IgM 0.1ml
L-ENK 英文名称: 亮酸脑啡肽抗体 0.1ml
氟喹诺酮类药单克隆抗体 小鼠单抗 1
Anti-Cullin 4a/FITC 荧光素标记Cullin 4a蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Secretin receptor 分泌素受体(抗原) 0.5mg
Hck 英文名称: 造血细胞激酶抗体 0.1ml
Rhesus antibody Rh C19orf21 19号染色体开放阅读框21抗体 规格 0.2ml
Anti-ET-1/FITC 荧光素标记内皮素-1抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh RPA32/RPA2 复制因子A蛋白2 规格 0.2ml
Anti-Myt1/FITC 荧光素标记髓鞘转录因子1抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Anti-AIMP2/JTV1/FITC 荧光素标记抗AIMP2抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Anti-Eukaryotic aspartyl protease/FITC 荧光素标记天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Cphospho-C CBL(Tyr700) 磷酸化原癌基因CBL2抗体 规格 0.1ml
Clenbuterol/KLH 克仑特罗偶联血蓝蛋白 1mg
KLHL26 英文名称: Kelch样蛋白26抗体 0.2ml
Rhesus antibody Rh UBE2Q1 泛素蛋白连接酶Q1抗体 规格 0.2ml
Anti-Eukaryotic aspartyl protease/FITC 荧光素标记天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml