检测原理：
细胞上清液、样本或标准品直接分配到检测板中，通过 HTRF® 试剂进行检测（384 孔低体积白色板或 Revvity 低体积 96 孔板，20 微升）。用 HTRF 供体和受体标记的抗体预先混合，并在一个分配步骤中加入，以进一步简化检测程序。通过简单地按比例调整每次添加的体积，该检测可以扩展到 1536 孔格式。

检测数据分析：
四参数逻辑（4PL）曲线通常被推荐用于拟合 ELISA 标准曲线。这种回归能够在比线性分析更宽的浓度范围内准确测量未知样本，使其非常适合用于分析细胞因子释放等生物系统。

要充分了解如何处理 HTRF 数据处理以及 4PL 1/y² 拟合，请访问此页面。

Revvity 还与 Myassays合作，以帮助你进行数据分析。通过点击此链接，你将能够访问一个免费的在线软件来进行你的 IL-2 分析。

检测细节：
人 IL-2 的 HTRF 标准曲线：
IL-2 标准曲线是在试剂盒中提供的检测稀释液 5 中生成的。

人 IL-2 检测规格

分析性能：
批内和批间

稀释线性

加标回收

交叉反应：
使用来自 IL-2 细胞因子家族的重组蛋白评估交叉反应。对蛋白质进行高达 10000 pg/mL 的测试，并为每种蛋白质生成标准曲线。在检测标准曲线上内插信号以内插浓度。该检测是人类特异性的，因为使用该检测未检测到小鼠 IL-2 细胞因子。

检测验证：
对 PBMC 诱导的 IL-2 释放的影响：
以每孔 25,000、50,000 和 100,000 个细胞的密度接种 PBMC，用 50 ng/mL 的 PMA/1 µg/mL 的离子霉素刺激 18 小时，并与（50 µg/mL）共同处理。然后将 16 µL 的上清液转移到白色检测板（384 孔低体积）中，使用 HTRF HP 人 IL-2 检测试剂盒进行分析。

用 PMA / 离子霉素和共同处理的细胞系对 HTRF 人 IL2 试剂盒的验证。

抗 CD3 和 CD28 抗体剂量反应对 IL-2 分泌的影响：
以每孔 200,000 个细胞的密度接种 Jurkat 细胞，用不断增加浓度的抗 CD3 和抗 CD28 抗体刺激 24 小时：抗 CD3 为 0、0.5、1、10 µg/mL，抗 CD28 为 0、1、5、20 µg/mL。然后将 16 µL 的上清液转移到白色检测板（384 孔低体积）中，使用 HTRF HP 人 IL-2 检测进行分析。

抗 CD3 和 CD28 抗体剂量反应对 IL2 分泌的影响。

来自不同供体的 PBMC 细胞中的 IL-2 分泌：
以每孔 100,000 个细胞的密度接种 PBMC，用 50 ng/mL 的 PMA/1 µg/mL 的离子霉素刺激 18 小时。然后将 16 µL 的上清液转移到白色检测板（384 孔低体积）中，使用 HTRF HP 人 IL-2 检测试剂盒进行分析。

来自不同供体的 PBMC 细胞中的 IL2 分泌。