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人原代细胞-Lonza-龙沙
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面议单克隆抗体 Anti GST-Tb 穴状化合物是一种针对用铽(Tb)标记 S - 转移酶产生的 IgG2a 抗体。已证明它可与来自大量表达载体的 GST 标签融合蛋白发生反应。
该试剂可用于生化和细胞两种形式,以研究各种相互作用:蛋白质 / 蛋白质、蛋白质 / 肽、蛋白质 / DNA、蛋白质 / RNA、蛋白质 / 碳水化合物、蛋白质 / 小分子、受体 / 配体。
HTRF 可以检测从皮摩尔到低毫摩尔的广泛亲和力常数范围。
检测原理:
在 HTRF 相互作用检测中,一部分(直接或间接)用供体标记,另一部分用受体标记(同样直接或间接)。信号强度与两部分的结合成正比。在此处所示的例子中:单克隆抗体 Anti GST-Tb 穴状化合物与带 GST 标签的 A部分结合,而B 部分* 与用 HTRF 受体标记的特异性抗体结合。* B部分也可以是化的、带标签的、Fc 融合的。在这些情况下,使用相应的用受体标记的 HTRF 试剂(抗标签、抗物种、蛋白 A、链霉亲和素)进行检测。
检测方案:
右侧的例子描述了使用 20 µL 最终检测体积来检测带 GST 标签的A部分和未带标签的B部分 * 之间相互作用的方案。分配两个部分(10 µL),孵育,加入单克隆抗体 Anti GST-Tb 穴状化合物(5 µL)和用受体标记的抗B部分(5 µL),孵育并读取。* B部分也可以是化的、带标签的、Fc 融合的或直接标记的。在这些情况下,使用相应的用受体标记的 HTRF 试剂(抗标签、抗物种、蛋白 A、链霉亲和素)进行检测。
检测细节:
测试次数与活性部分如何相关?
每孔的平均结合物数量反映了总体生物材料含量。通常优选使用活性部分的量而不是总结合物的量。对于穴状化合物和 d2 结合物,总结合物的量等于活性部分的量,因为标记的分子量可以忽略不计。对于用 XL665 标记的实体则不是这样,总结合物的量将根据 XL665 结合物的最终摩尔比而变化,然而,Revvity 提供的活性部分的量是恒定的,并且基于订购的测试次数。
推荐的穴状化合物和 XL665 结合物的量:
穴状化合物结合物不能过量,以防止读数器饱和和不可接受的背景水平。在大多数情况下,1 到 5nM 的穴状化合物浓度是合适的,并且根据所使用的与 HTRF 兼容的读数器,在 620nm 处将产生 20,000 到 80,000 cps。XL665 结合物必须尽可能与其检测对应物匹配,以便最大数量的生物分子被 XL665 受体标记。因此,要检测浓度为 20nM 的带标签分子,抗标签 - XL665 的浓度应是等摩尔或更高。