分析原理
在均相时间分辨荧光（HTRF）相互作用分析中，一部分（直接或间接）用供体进行标记，另一部分用受体进行标记（同样直接或间接）。信号强度与两部分的结合程度成正比。在此处所示的示例中：链霉亲和素 - 铽穴状化合物与化的标记部分 A 结合，而B部分 * 与用 HTRF 受体标记的特异性抗体结合。* B部分也可以是化、带有标签、Fc 融合的。在这些情况下，使用相应的用受体标记的 HTRF 试剂（抗标签、抗物种、蛋白 A、链霉亲和素）进行检测。

分析方案
如下示例描述了使用 20 µL 最终分析体积检测化标记的A部分和未标记的 B部分* 之间相互作用的方案。分装两部分（10 µL），孵育，加入链霉亲和素 - 铽穴状化合物（5 µL）和用受体标记的抗 B部分（5 µL），孵育并读取。* B部分也可以带有标签、Fc 融合或直接标记。在这些情况下，使用相应的用供体标记的 HTRF 试剂（抗标签、抗物种、蛋白 A、链霉亲和素）进行检测。

分析细节
测试次数与活性部分有何关系？

每个孔的平均结合物数量反映了总体生物材料含量。通常优选使用活性部分的量而不是总结合物的量。对于穴状化合物和 d2 结合物，总结合物的量等于活性部分的量，因为标记的分子量可以忽略不计。对于用 XL665 标记的实体则不是这样，总结合物的量将根据 XL665 结合物的最终摩尔比而变化，但是，由 Revvity 提供的活性部分的量是恒定的，并基于订购的测试次数。

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穴状化合物和 XL665 结合物的推荐用量
穴状化合物结合物不能过量，以防止读数器饱和和不可接受的背景水平。在大多数情况下，1 至 5nM 的穴状化合物浓度是合适的，并且根据所使用的与 HTRF 兼容的读数器，在 620nm 处将产生 20,000 至 80,000 cps。XL665 结合物必须尽可能与其分析对应物匹配，以便最大数量的生物分子被 XL665 受体标记。因此，要在 20nM 的分析浓度下检测标记分子，抗标签 - XL665 的浓度应是等摩尔或更高。