iElisa 克伦特罗抗生素类检测试剂盒

iElisa 克伦特罗抗生素类检测试剂盒

iElisa克伦特罗检测试剂盒

(C/N: CE2012-G) 

--－北京中检维康生物技术有限公司

1、检测原理

本试剂盒是利用竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被抗克伦特罗抗原。检测时，加入标准品或样品溶液，克伦特罗抗体及酶标记物，包被抗原和加入样本中的克伦特罗竞争性地与克伦特罗抗体结合后，再与酶标记物形成抗原抗体复合物，用TMB底物显色；加入反应终止液，在450nm波长酶标仪下进行检测，样品中的克伦特罗浓度与吸收光强度成反比。

2、检测范围

本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较，能经济、快速地检测出尿样、肌肉、肝脏及饲料等中的克伦特罗。

与类似物的交叉反应率：

克伦特罗&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;100%

特布他林&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;7%

沙丁胺醇&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;25%

盐酸肾上腺素&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;＜0.1%

去甲肾上腺素&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;＜0.1%

莱克多巴胺&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;＜0.1%

多巴酚丁胺&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;＜0.1%

3、试剂盒组成

1. 酶标板1块，96孔/板
2. 标准液6瓶（1mL/瓶）：

0 ppb、0.2ppb、0.6ppb、1.8ppb、5.4ppb、16.2ppb

1. 抗体工作液 &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;9mL
2. 酶标记物 &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;3mL
3. 底物液A &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;7mL
4. 底物液B &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;7mL
5. 终止液   &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;7mL
6. 说明书 &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;1份

4、需要但试剂盒中不提供的器材和试剂

（1）设备

1. 微孔板酶标仪(450nm)
2. 振荡器
3. 离心机
4. 微量移液器：20μL～200μL,100μL~1000μL
5. 容量瓶：100mL，500mL，1000mL

（2）试剂

1. 氢氧化钠、浓盐酸、乙酸乙酯、乙腈

5、溶液的配制

样本前处理需配制：

1. 配液1：0.1M盐酸溶液

量取0.86mL浓盐酸加去离子水混匀定容至100mL

1. 配液2：1M盐酸溶液

量取8.6mL浓盐酸加去离子水混匀定容至100mL

1. 配液3：0.1M氢氧化钠溶液（组织样本）

称0.4gNaOH加去离子水混匀溶解，定容至100mL

1. 配液4：1M氢氧化钠溶液（饲料样本）

称4.0gNaOH加去离子水混匀溶解，定容至100mL

1. 配液5：乙腈-0.1M盐酸（组织样本）

乙腈与0.1M盐酸溶液按体积比84:16混匀

6、样本前处理方法

样本处理前须知

处理任何样本时，都须注意：

1. 实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
2. 实验之前须检查各种实验器具是否干净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。

样本处理步骤：

尿样

1. 尿样（若浑浊可以4000转/分 离心5分钟，取清亮部分）,取20μL进行分析。
2. 不用时应冷冻保存。

稀释倍数为1

畜禽组织（鸡、鸭、猪肌肉/肝脏等）

1. 称取2±0.05 g匀浆的样品于50mL离心管中，加入6mL乙腈-0.1M盐酸，振荡5分钟；室温4000转/分以上离心10分钟；
2. 取上清3mL，加2mL 0.1M氢氧化钠溶液，6mL乙酸乙酯，振荡5分钟；室温4000转/分，以上离心10分钟；
3. 取全部上清至干净玻璃试管中，于56℃水浴下氮气/空气吹干；
4. 加1mL去离子水复溶，振荡30秒。
5. 取20μL进行分析。

稀释倍数为1。

饲料

1. 用食品粉碎机或乳钵研碎饲料样品，称5±0.05 g研碎的饲料样品，加10mL乙腈；用振荡器剧烈震荡5分钟，室温3000转/分离心5分钟；
2. 取3mL上层清亮有机相至10mL干净的玻璃试管中，于50-60℃氮气流下吹干。
3. 加入1mL正己烷，用涡旋仪涡旋30秒；再加入1mL去离子岁混合，用涡旋仪涡旋1分钟，3000转/分离心5分钟；去除上层正己烷相。
4. 取下层20μL进行分析。

稀释倍数为1。

7、酶联免疫检测步骤

测定前须知：

1. 使用之前将所有试剂和需用微孔板回升至室温。
2. 使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
3. 在使用中不要让微孔干燥。
4. 在ELISA分析中的重复性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
5. 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用该板膜盖住微孔板。

测定步骤：

1. 将所需试剂从冷藏环境中取出，在室温下平衡30分钟，每种液体使用前均须摇匀。注意标准液均需做2个平行试验。
2. 加标准液或样品液20μL到相应的微孔中，然后加20μL酶标记物，80μL抗体工作液，用膜盖好，25℃下避光反应30分钟。
3. 洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，加去离子水 250mL/孔，每次浸泡15~30秒，充分洗涤4~5次，用吸水纸拍干。
4. 显色：每孔先各加入底物液A 50μL，再各加入底物液B 50μL，轻轻晃荡混匀，并在25℃下避光反应15分钟。
5. 读数：每孔各加50μL终止液，在酶标仪于450nm处测定OD值（建议用450/630nm双波长检测，在5分钟内读完数据）。

8、结果分析    

所测得的标准液或样品吸光度的平均值（B）除以di一个标准液（0标准液）的吸光度（B<苏b>0）值再乘以100%，得到百分吸光度值。

百分吸光度值（%）＝B/B<苏b>0 ×100%

        以标准品浓度的10为底的对数为X轴， 百分吸光值为Y轴，绘制标准曲线。将样本的百分吸光值代入标准曲线，从标准曲线上读出样本所对应的值，作为10的幂，乘以稀释倍数，即为样品中所含克伦特罗的量。利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。/

9、试剂盒灵敏度、准确度、精密度

试剂盒灵敏度：0.1ppb

样本低检测限：

尿样&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;0.2ppb

组织&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;0.4ppb

饲料 &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;0.4ppb

回收率：

尿样  &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;90±10%

组织&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;85±10%

饲料  &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;80±15%

精密度：

 试剂盒的变异系数均小于10%

10、注意事项

1. 室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3. 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。如不慎滴漏到皮肤上，请尽快用水冲洗。
4. 不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
5. 保存试剂盒于2-8℃，不要冷冻，将不用的微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
6. 显色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450nm）值小于0.5（A450nm<0.5 ）时，表示试剂可能变质。
7. 在加入底物液后，一般显色15分钟即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20分钟（或更长），但不得超过30分钟。反之，则减短反应时间。
8. 该试剂盒佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

11、贮藏条件及保存期

贮藏条件：在2～8℃保存试剂盒

保存期：本试剂盒有效期为12个月。