中检维康iElisa赭曲霉毒素A检测试剂盒

1. 概要

    赭曲霉毒素Ａ由 Aspergillus 和 Penicillium 两类霉菌产生，除明显的肾毒性外，赭曲霉毒素A还表现出肝毒性、致畸性、致癌性和免疫抑制性等特性。对人体健康而言，危害不仅来源于污染的植物性食品，也通过动物性食品的摄入。我国规定谷物、豆类及其制品中赭曲霉毒素A不得超过5μg/kg，欧盟规定谷物、豆类及其制品中赭曲霉毒素A不得超过3μg/kg。

1. 原理

测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有抗抗体。加入赭曲霉毒素A（OTA）标准品或样品、酶标抗原和抗体后，游离的赭曲霉毒素A与酶标抗原竞争结合抗体，抗体或抗体结合物与固定在微孔板上的抗抗体再结合，没有结合的标准品、酶标抗原及抗体被洗去，加入TMB底物显蓝色，加入终止液后颜色由蓝变黄，用酶标仪在450nm处检测，吸光值与样品中赭曲霉毒素A含量成负相关，与标准曲线比较即可得出赭曲霉毒素A的含量。

 
3. 试剂盒组成

1. 包被有抗抗体的96微孔板：1块（96孔，12条×8 孔）
2. OTA标准品：0 ppb、0.2 ppb、0.8 ppb、3.0 ppb、10 ppb                    1 瓶 × 1.0mL
3. OTA抗体：                1 瓶 × 10mL
4. OTA酶标抗原：            1 瓶 × 10mL
5. 10× 浓缩洗涤液：          1 瓶 × 50mL
6. OTA稀释缓冲液：          1 瓶 ×50mL
7. 显色底物液：              1 瓶 ×17mL
8. 反应终止液：              1 瓶 × 7mL
9. 试剂盒说明书
10. 质检报告

1. 需要的仪器、试剂

1）仪器   

1. 酶标仪450nm（iELisa全自动酶标仪或相当者）
2. 微量移液器：20μL-200μL单道，100μL-1000μL单道, 50μL-300μL八道
3. 多功能旋转混合器（或者摇床、高速均质器）
4. 酶标板振荡器
5. 涡旋混合器
6. 50mL离心管
7. 1.5mL离心管
8. 定性滤纸
9. 过滤漏斗
10. 天平：感量0.01g

2）试剂

1. 样品提取液70%甲醇：取700mL甲醇，加300mL纯水，混匀。
2. 纯水（蒸馏水、去离子水）

8.  注意事项

1. 室温低于20℃或试剂及标本未回到室温（20- 25℃）会导致数值偏低。
2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。
3. 标准物质和显色液对光敏感，避免直接暴露在光线下。
4. 混合要均匀，洗板要*（包括加样品和标准液的时候都必需充分混合均匀）。
5. 反应停止液为强酸性物质，避免接触皮肤。
6. 不要使用过了有效期的试剂盒，也不要稀释或搀杂使用不同生产厂家的试剂盒这样会引起灵敏度降低。
7. 试剂盒的储存条件是2-8℃，切勿冷冻。

9.  中检维康iElisa赭曲霉毒素A检测试剂盒检测方法灵敏度、准确度、精密度

1. 检测限LOD: 谷物1ppb（μg /kg），饲料2.5ppb尿液1.0。（LOD：空白样品测定值+2倍标准偏差SD）
2. 定量限LOQ: 谷物2ppb，饲料5ppb,尿液1.5ppb。
3. 定量检测范围：谷物2-50ppb，饲料5-125ppb,饲料1.5-25ppb。